一种生产L-色氨酸的重组微生物、及其构建方法和发酵工艺技术

一种生产L‑色氨酸的重组微生物、及其构建方法和发酵工艺，属于基因工程技术领域。本发明专利技术为解决现有技术中微生物法生产L‑色氨酸的转化率较低，发酵性能较差的技术问题，提供一种生产L‑色氨酸的重组微生物WA‑D，以CGMCC NO.11073大肠杆菌为出发菌株，弱化purF基因，以及在ycap基因位点异源引入glnA和prs基因，增加色氨酸合成前体PRPP和glnA并减少副产物谷氨酸的量。本发明专利技术提供的重组微生物WA‑D与发酵工艺相结合，提高了L‑色氨酸产量和转化率的能力，有效降低了副产物谷氨酸的产量。本发明专利技术提供的重组微生物WA‑D可应用于大规模工业化生产L‑色氨酸。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，涉及一种生产l-色氨酸的重组微生物、及其构建方法和发酵工艺。

技术介绍

1、l-色氨酸是人体和动物生命活动中八种必需的氨基酸之一，对人和动物的生长发育、新陈代谢起着重要的作用，广泛应用于饲料行业中。l-色氨酸的生产最早主要依靠蛋白质水解法和化学合成法，但是随着对微生物法生产l-色氨酸研究的不断深入，微生物法已经走向实用，并且处于主导地位。微生物法又可分为直接发酵法、微生物转化法和酶法，目前l-色氨酸生产主要以微生物发酵法生产为主；微生物发酵法具有原料价格低廉、工艺控制简单、产品质量可靠等优点。

2、但随着发酵工业的快速发展，利用发酵法生产l-色氨酸对培养基营养成分和发酵调控的合理性提出了更高的要求；而优良的l-色氨酸生产菌株、合理的培养基组成和适当的发酵调控策略，均有利于提高l-色氨酸的产酸水平。

3、大肠杆菌具有遗传背景清晰，操作较简单等优点，是工业生产色氨酸的主要微生物。大肠杆菌生产l-色氨酸是从pep(磷酸烯醇式丙酮酸)与e4p(赤藓糖-4-磷酸)的聚合产生的dahp(3-脱氧d-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生产L-色氨酸的重组微生物的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，S1中所述的出发菌株为CGMCCNO.11073大肠杆菌。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，S2中所述purF基因核苷酸序列为SEQID No.1所示，所述起始密码子的弱化是指将ATG替换为GTG。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，S4中所述ycap基因的sgRNA靶序列为SEQ ID No.2所示，所述启动子pamyL核苷酸序列为SEQ ID No.3所示，所述glnA基因核苷酸序列为SEQ ...

【技术特征摘要】

1.一种生产l-色氨酸的重组微生物的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，s1中所述的出发菌株为cgmccno.11073大肠杆菌。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，s2中所述purf基因核苷酸序列为seqid no.1所示，所述起始密码子的弱化是指将atg替换为gtg。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，s4中所述ycap基因的sgrna靶序列为seq id no.2所示，所述启动子pamyl核苷酸序列为seq id no.3所示，所述glna基因核苷酸序列为seq id no.4所示，所述prs基因核苷酸序列为seq id no.5所示。

5.一种生产l-色氨酸的重组微生物wa-d，其特征在于，所述重组微生物wa-d是采用权利要求1至4任意一项所述构建方法获得。

6.权利要求5所述的重组微生物wa-d及其发酵产物在生产l-色氨酸中的应用。

7.一种生产l-色氨酸的发酵工艺，其特征在于，所述发酵工艺是将权利要求4所述的重组微生物wa-d接种至平板固体斜面培养基中，于36℃培养16h；将上述培养后的wa-d接种至种子液摇瓶中，于36℃培养至对数生长期；将上述培养至对数生长期的wa-d接种至发酵培养基中，于36℃、ph＝7.0、溶氧25％-30％、罐压0.02mpa条件下...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹国强，卢煜，邹德勇，李婧瑶，张宇擎，张晓宇，李雪姚，
申请(专利权)人：哈尔滨象柏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：