一种提高重组胶原蛋白可溶性表达及稳定性的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高重组胶原蛋白可溶性表达及稳定性的方法，属于基因工程技术领域。本发明专利技术将重复序列(GPP)<subgt;10</subgt;中部分脯氨酸改造为天冬氨酸和赖氨酸。本发明专利技术的重复序列适用于多种胶原蛋域，且构建得到的胶原蛋白纯度达到90％以上，较未改造、由重复序列(GPP)<subgt;10</subgt;组成的胶原蛋白(V‑P10BP10)产量提高23.6％以上、热稳定性和可溶性提高，同时还保持较好的耐盐性。本发明专利技术提高了生产胶原蛋白的产量，在生物材料领域有着广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提高重组胶原蛋白可溶性表达及稳定性的方法，属于基因工程。

技术介绍

1、胶原蛋白是哺乳动物中含量最多的蛋白质，广泛分布于皮肤、骨骼、肌腱、血管系统、肌肉结缔组织等，至今已发现28种类型，主要分为纤维性胶原蛋白、网状胶原蛋白、珠状丝状胶原蛋白、锚定纤维蛋白等，其中纤维性胶原蛋白中ⅰ型、ⅱ型、ⅲ型胶原蛋白占人体胶原蛋白的80％～90％。

2、胶原蛋白序列是由重复肽三联体(gly-xaa-yaa)组成，其中xaa和yaa通常是脯氨酸和羟脯氨酸。胶原蛋白的结构基础是由3条α链交错形成聚脯氨酸ⅱ型的左手螺旋构象，即三螺旋结构，正确折叠的三螺旋结构对于胶原蛋白在细胞外基质实现细胞与细胞之间相互作用至关重要。对胶原蛋白序列的研究表明胶原蛋白三条链的紧密包装、链之间形成的氢键、广泛的水合网络以及高含量的脯氨酸和羟脯氨酸是影响胶原蛋白三螺旋结构稳定的重要因素。由于胶原蛋白具有良好的生物学特性，其在组织工程、临床医学、食品工业、包装材料、化妆品、医学美容、生物材料以及医疗器械等方面都有着广泛的应用。

3、目前，根据来源，胶原蛋白主要分本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种胶原蛋白单链，其特征在于，所述单链结构为第一重复序列-胶原域-第二重复序列；其中，第一重复序列或第二重复序列中至少一个的氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQID NO.5所示。

2.根据权利要求1所述胶原蛋白单链，其特征在于，所述胶原蛋白单链第一重复序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，第二重复序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；或者，胶原蛋白单链第一重复序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，第二重复序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；或者，胶原蛋白单链第一重复序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，第二重复序列的氨基酸...

【技术特征摘要】

1.一种胶原蛋白单链，其特征在于，所述单链结构为第一重复序列-胶原域-第二重复序列；其中，第一重复序列或第二重复序列中至少一个的氨基酸序列如seq id no.4或seqid no.5所示。

2.根据权利要求1所述胶原蛋白单链，其特征在于，所述胶原蛋白单链第一重复序列的氨基酸序列如seq id no.5所示，第二重复序列的氨基酸序列如seq id no.3所示；或者，胶原蛋白单链第一重复序列的氨基酸序列如seq id no.3所示，第二重复序列的氨基酸序列如seq id no.4所示；或者，胶原蛋白单链第一重复序列的氨基酸序列如seq id no.3所示，第二重复序列的氨基酸序列如seq id no.5所示；或者，胶原蛋白单链的第一重复序列和第二重复序列均如seq id no.4所示。

3.根据权利要求1所述胶原蛋白单链，其特征在于，所述第一重复序列的n端还含有折叠域；可选地，所述折叠域的氨基酸序列如seq id no.1所示；可选地，折叠域与第一重复序列间通过酶切位点连接；可选地，所述酶切位点为lvprgsp。

4.编码权利要求1～3任一所述胶原蛋白单链的基因、携带编码权利要求1～3任一所述胶原蛋白单链的基因的质粒或者细胞。

5.一种提高胶原...

【专利技术属性】
技术研发人员：张萌，许菲，周浩宇，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：