一种利用紫草细胞大批量制备紫草素的方法技术

一种利用紫草细胞大批量制备紫草素的方法，其特征是它包括以下步骤：1)细胞准备：将紫草细胞加入到PBS缓冲液中，再加入磁性微球载体，搅拌均匀，制备高产细胞混合液；2)增殖培养：将紫草细胞和磁性微球载体一同加入细胞生长培养基中，进行光照培养，培养时进行搅拌，培养完成后，排出细胞生长培养基，获得组织培养物；3)转化培养：将组织培养物转移至色素生产培养基中，进行无光培养，培养完成后，获得紫草细胞液；4)分离纯化：将紫草细胞液与色素生产培养基分离，并对紫草素进行提取纯化。本发明专利技术提高了紫草细胞增殖速度，可快速的将吸附有紫草细胞的磁性微球载体快速转移到色素生产培养基中，进行培养，以减少滤网对紫草细胞的损伤并提高生产效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物组织培养，尤其是一种紫草素的制备技术，具体地说是一种利用紫草细胞大批量制备紫草素的方法。

技术介绍

1、紫草(l.erythrorhizon)是紫草素(shikonin)的代表性来源，近年来面临灭绝的危险，其栽培非常困难；它的发芽率低，幼苗非常容易受到病毒的感染，植物对消毒剂敏感。紫草需要生长三年才能获得足够数量的根，才具有商业应用价值，从中可以制备紫草素，但三年的生长没有病虫害通常非常困难，然而随着紫草素在抗肿瘤、抗炎、抗菌等产品中被应用，紫草素的需求在不断提高，因此市面上的紫草素价格不断上涨，而传统的种植方法难以满足市场上的需求，目前的研究方向主要聚焦在细胞培养和化学合成方向。

2、目前，在紫草细胞培养的技术路线上，tabata等人提出了紫草细胞两步培养法，即先采用mg-5培养基进行增殖培养，此时紫草细胞在生物反应器内进行快速繁殖，培养9天左右，再将获得的紫草细胞培养物转移到由fujita等人提出的m-9色素生产培养基中，无光培养，此时紫草细胞的繁殖被抑制，紫草细胞开始生成紫草素衍生物，并将紫草素衍生物分泌到细胞外，附着在本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种利用紫草细胞培育制备紫草素的方法，其特征在于，它包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述磁性微球载体包括磁性核心、中间层和外包覆层，所述磁性微球载体的直径在50-250μm；其中，磁性核心采用氯化钴、氯化镍、钴-镍合金中任一种；中间层为SiO2，中间层将磁性核心包裹；外包覆层采用琼脂、胶原、纤维素、甲壳质及衍生物和海藻盐中的任一种。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2中的细胞生长培养基采用MG-5细胞生长培养基，培养时间为9天，培养温度在21-30℃；步骤3中的色素生产培养基采用M-9色素生产培养基，培养时间为14天，培养温...

【技术特征摘要】

1.一种利用紫草细胞培育制备紫草素的方法，其特征在于，它包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述磁性微球载体包括磁性核心、中间层和外包覆层，所述磁性微球载体的直径在50-250μm；其中，磁性核心采用氯化钴、氯化镍、钴-镍合金中任一种；中间层为sio2，中间层将磁性核心包裹；外包覆层采用琼脂、胶原、纤维素、甲壳质及衍生物和海藻盐中的任一种。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2中的细胞生长培养基采用mg-5细胞生长培养基，培养时间为9天，培养温度在21-30℃；步骤3中的色素生产培养基采用m-9色素生产培养基，培养时间为14天，培养温度在21-30℃。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤3转化培养中，在色素生产培养基变成红色后，向色素生产培养基中加入石油醚，搅拌培养1-10h，吸走上层的石油醚，再开启搅拌培养。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述石油醚的加入次数为2次，分别是培养至第...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁国武，宋莲，
申请(专利权)人：南京中科拜尔医药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：