一种双功能黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶突变体及其在FAD合成中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种双功能黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶突变体及其在FAD合成中的应用。本发明专利技术公开的突变体为RFK/FADS<supgt;C18R</supgt;或RFK/FADS<supgt;C18R‑R46H</supgt;；RFK/FADS<supgt;C18R</supgt;的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示，RFK/FADS<supgt;C18R‑R46H</supgt;的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。携带所述双功能黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶突变体基因质粒的基因工程菌，在摇瓶有氧条件下以葡萄糖为底物通过简单的发酵工艺生产黄素腺嘌呤二核苷酸，含突变基因的菌株XF02和XF03的FAD产量依次为79.31mg/l和167.56mg/l，比含未突变基因的菌株XF01分别提高了58.62％和235.12％。通过代谢工程策略构建微生物“细胞工厂”，经过改造的微生物能够利用价格低廉的原料在微生物细胞内生成所需的天然产物。这一进步不仅降低了FAD的生产成本，同时也提高了其生产过程的环境可持续性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，具体地涉及一种双功能黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶突变体及其在fad合成中的应用。

技术介绍

1、黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide，fad)，是核黄素(riboflavin，rf)的代谢活性存在形式。作为细胞内重要的辅因子，fad在电子传递、光合作用、脂肪酸氧化等细胞代谢中起着重要作用，目前已经广泛应用于医药及生物酶催化等领域中。在生物酶催化反应中，黄素单核苷酸fmn(flavin mononucleotide，fmn)和fad均是细胞中大多数黄素蛋白或黄素酶中不可或缺的氧化还原辅因子。此外，fad还广泛应用于生物传感器和微生物燃料电池的研发和应用。

2、目前，fad主要通过全细胞催化法进行商业化生产，利用过表达fad合成酶的工程菌株可将体外添加的底物fmn和atp进一步催化为fad和ppi。然而，在全细胞催化生产fad时，由于底物atp的价格高昂，导致生产成本较高。与之相比，底物廉价并且也无需高密度培养的微生物发酵法则具有更大的潜力。研究人员通过代谢工程策略构建微生物“细胞工厂”，这本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种双功能黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶突变体，其特征在于，所述双功能黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶突变体为RFK/FADSC18R或RFK/FADSC18R-R46H；RFK/FADSC18R的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示，RFK/FADSC18R-R46H的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。

2.一种编码基因，其特征在于，所述基因编码权利要求1所述双功能黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶突变体的基因，所述编码RFK/FADSC18R基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5，所述编码RFK/FADSC18R-R46H基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

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【技术特征摘要】

1.一种双功能黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶突变体，其特征在于，所述双功能黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶突变体为rfk/fadsc18r或rfk/fadsc18r-r46h；rfk/fadsc18r的氨基酸序列如seq id no.15所示，rfk/fadsc18r-r46h的氨基酸序列如seq id no.16所示。

2.一种编码基因，其特征在于，所述基因编码权利要求1所述双功能黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶突变体的基因，所述编码rfk/fadsc18r基因的核苷酸序列如seq id no.5，所述编...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈涛，朱星宇，王雪，王智文，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：