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一种代谢工程改造提升谷氨酸棒杆菌谷氨酸产量的方法技术

技术编号:45573780 阅读:30 留言:0更新日期:2025-06-20 21:56
本发明专利技术公开了一种代谢工程改造提升谷氨酸棒杆菌谷氨酸产量的方法,属于代谢工程和合成生物学领域。本发明专利技术提供的谷氨酸棒杆菌增强了谷氨酸脱氢酶、谷氨酸合酶表达,敲除了异柠檬酸裂解酶,减弱了乙醛酸循环的碳流量;增强了转录因子RosR、NAD激酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶表达,进一步提升了谷氨酸的产量,最后优化了发酵工艺。以本发明专利技术提供的重组谷氨酸棒杆菌进行5L发酵罐补料分批发酵,32h,谷氨酸产量达230.57g/L,糖酸转化率为76.2%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于代谢工程、合成生物学领域,具体涉及一种代谢工程改造提升谷氨酸棒杆菌谷氨酸产量的方法


技术介绍

1、谷氨酸是世界上第一大氨基酸产品,广泛应用于味精等调味品中,它还被广泛用于生产化学品、药品、保健食品,同时也是其他氨基酸产品的重要原料。

2、目前国内外在谷氨酸生产菌株的选育研究主要集中于:利用代谢工程理论、代谢网络模型中流量分析、现代分子生物学等技术手段研究谷氨酸生产菌株的生理特性以及合成谷氨酸的关键节点。同时通过基因组学手段和转录组学分析技术对谷氨酸高产菌株进行基因组测序比较,利用分子生物学技术对其进行分析,研究基因组学上的变化对谷氨酸产量以及菌株糖酸转化率的影响,从而选育优良的工业化生产菌株。

3、li等通过构建谷氨酸棒杆菌细胞外层成分霉菌酸合成途径中基因缺失菌株,谷氨酸产量提高了9倍。ogata等通过研究铜离子对谷氨酸棒杆菌的胁迫作用诱导产生谷氨酸,产量提高了1.3倍。陈宁等通过温度控制实现细胞膜某些结构的改变,在温度转换后实现了从谷氨酸非积累型细胞向谷氨酸积累型细胞的转换,谷氨酸最高产量为181g/l。李德衡等基本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种谷氨酸脱氢酶突变体,其特征在于,所述谷氨酸脱氢酶突变体是在对应于亲本谷氨酸脱氢酶的氨基酸序列的基础上,在第186位、第222位中的一个或多个位点具有氨基酸突变后得到的;

2.根据权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶突变体,其特征在于,所述谷氨酸脱氢酶突变体是在对应于SEQ ID NO.12所示谷氨酸脱氢酶的氨基酸序列的基础上,

3.编码权利要求1或2所述的谷氨酸脱氢酶突变体的多核苷酸或携带所述多核苷酸的载体或表达所述权利要求1或2所述的谷氨酸脱氢酶突变体的细胞。

4.一种多核苷酸合成试剂盒,其特征在于,包含权利要求1或2所述谷氨酸脱氢酶突变体。

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【技术特征摘要】

1.一种谷氨酸脱氢酶突变体,其特征在于,所述谷氨酸脱氢酶突变体是在对应于亲本谷氨酸脱氢酶的氨基酸序列的基础上,在第186位、第222位中的一个或多个位点具有氨基酸突变后得到的;

2.根据权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶突变体,其特征在于,所述谷氨酸脱氢酶突变体是在对应于seq id no.12所示谷氨酸脱氢酶的氨基酸序列的基础上,

3.编码权利要求1或2所述的谷氨酸脱氢酶突变体的多核苷酸或携带所述多核苷酸的载体或表达所述权利要求1或2所述的谷氨酸脱氢酶突变体的细胞。

4.一种多核苷酸合成试剂盒,其特征在于,包含权利要求1或2所述谷氨酸脱氢酶突变体。

5.一种提高谷氨酸脱氢酶的酶活的方法,其特征在于,所述方法为,在对应于亲本谷氨酸脱氢酶的seq id no.12的氨基酸序列的基础上,

6.一种重组谷氨酸棒杆菌,其特征在于,所述重组谷氨酸棒杆菌表达了权利要求1或2所述的突变体;

7.根据权利要求6所述重组...

【专利技术属性】
技术研发人员:饶志明乔郅钠陈坚刘芸陈宁徐美娟杨套伟张显
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:

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