一种能够在嗜松篮状菌细胞内自主复制的复制子及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种能够在嗜松篮状菌细胞内自主复制的复制子及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术的复制子tpARSrp的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。本发明专利技术构建了一种能够在嗜松篮状菌表达系统中发挥复制功能的复制子tpARSrp，该复制子具有比AMA1复制子更高的稳定性，丰富了复制子元件库，能够用于构建嗜松篮状菌的非整合型表达载体，用于外源基因瞬时表达或基因编辑，为嗜松篮状菌的基因编辑提供了工具，拓展了丝状真菌利用复制子的选择多样性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别是涉及一种能够在嗜松篮状菌细胞内自主复制的复制子及其应用。

技术介绍

1、在真菌自主复制序列未被发现之前，丝状真菌转化系统最主要的缺陷是没有类似于可以在酵母菌染色体外自主复制的质粒，导致整合转化的效率低下。自研究人员在酿酒酵母中发现ars序列以来，关于复制子的研究在真菌中展开，最早在构巢曲霉中发现含有ama1序列，可以在染色体外自主复制，该序列也被应用于其他丝状真菌。至今有关丝状真菌的自主复制序列研究进展缓慢，因此筛选潜在的真菌复制子可为合成生物学的发展提供一定的参考价值。

2、嗜松篮状菌(talaromycespinophilus)具有表达效率高、分泌能力强、易于高细胞密度培养、产物纯化回收成本低等优势，适合用于大规模工业化生产，且在食品和药品领域有广阔的应用潜力，是目前最常用的丝状真菌表达宿主之一，甚至超过了里氏木霉。然而，嗜松篮状菌在应用中缺少稳定的非整合型质粒，基因操作的主要载体仍然是整合型质粒，整合型质粒的拷贝数低，通常采用高浓度抗生素筛选或在体外构建不含复制子的多拷贝表达载体。由于抗生素用量较高、操作相对复杂本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种能够在嗜松篮状菌细胞内自主复制的复制子tpARSrp，其特征在于，所述复制子tpARSrp的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

2.权利要求1所述的复制子tpARSrp的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述30种真菌为黑曲霉、米曲霉、黄曲霉、构巢曲霉、烟曲霉、淡紫拟青霉、产黄青霉、绳状青霉、宛氏拟青霉、米根霉、少根根霉、小孢根霉、匍枝根霉、台湾根霉、灵芝、绿色木霉、长枝木霉、康宁木霉、里氏木霉、哈茨木霉、卷枝毛霉、总状毛霉、白地霉、林生地霉、嗜松篮状菌、绳状篮状菌、球孢白僵菌、球毛壳、棘孢曲霉和腐皮...

【技术特征摘要】

1.一种能够在嗜松篮状菌细胞内自主复制的复制子tparsrp，其特征在于，所述复制子tparsrp的核苷酸序列如seq id no.9所示。

2.权利要求1所述的复制子tparsrp的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述30种真菌为黑曲霉、米曲霉、黄曲霉、构巢曲霉、烟曲霉、淡紫拟青霉、产黄青霉、绳状青霉、宛氏拟青霉、米根霉、少根根霉、小孢根霉、匍枝根霉、台湾根霉、灵芝、绿色木霉、长枝木霉、康宁木霉、里氏木霉、哈茨木霉、卷枝毛霉、总状毛霉、白地霉、林生地霉、嗜松篮状菌、绳状篮状菌、球孢白僵菌、球毛壳、棘孢曲霉和腐皮镰孢。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述mabsori-f/r引物的序列如seqid no.1-2所示；所述hind iii-f/r引物的序列如seq id no.5-6所示；所述tparsrp-f/r引物的序列如seq id no.10-11所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭建军，王通，曾静，袁林，岳斯源，李鹏，
申请(专利权)人：江西省科学院微生物研究所江西省流域生态研究所，
类型：发明
国别省市：