一种酶法合成脱氧核糖核苷三磷酸的方法技术

本发明专利技术涉及酶催化生产脱氧核糖核苷三磷酸领域，具体涉及一种酶法合成脱氧核糖核苷三磷酸的方法。本发明专利技术通过脱氧核糖核酸酶酶解鲑鱼精DNA得到dNMP，酶解率达到99.5％以上；再将酶解得到的dNMP利用腺苷酸激酶、胸苷酸激酶、胞苷酸激酶、鸟苷酸激酶、核苷二磷酸激酶和乙酸激酶催化反应得到相应的dNTP，摩尔转化率均大于80％。该合成方法操作简单，生产周期短，易于分离纯化，生产成本低，具有重要的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及酶催化生产脱氧核糖核苷三磷酸领域，具体涉及一种酶法合成脱氧核糖核苷三磷酸的方法。

技术介绍

1、脱氧核糖核苷三磷酸(dntp)是dna链的构建单元，由四种不同的脱氧核糖核苷酸单元组成，包括脱氧腺苷酸三磷酸(datp)、脱氧胸腺嘧啶核苷酸三磷酸(dttp)、脱氧胞嘧啶核苷酸三磷酸(dttp)和脱氧鸟嘌呤三磷酸(datp)。dntp在细胞分裂和dna复制过程中扮演重要的角色，是dna合成的原料。

2、目前脱氧核糖核苷三磷酸的合成方法有化学法和生物法，化学法会用到有毒试剂，后处理困难；而生物法目前的合成时间长、合成效率较低。因此，急需开发一种高效环保的合成脱氧核糖核苷三磷酸方法。

技术实现思路

1、本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种酶法合成脱氧核糖核苷三磷酸的方法。

2、为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：

3、一种酶法合成脱氧核糖核苷三磷酸的方法，将dnmp置于含有激酶酶液的反应体系中进行酶促反应，合成脱氧核糖核苷三磷酸；<本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种酶法合成脱氧核糖核苷三磷酸的方法，其特征在于，将dNMP置于含有激酶酶液的反应体系中进行酶促反应，合成脱氧核糖核苷三磷酸；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解，其酶解反应体系为：10～40g/L鲑鱼精DNA，1～10g/L脱氧核糖核酸酶，溶剂为水；所述酶解，其酶解条件为：酶解温度为40～60℃，pH值6.0～8.0，酶解时间为5～12h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的激酶酶液是通过将腺苷酸激酶、胸苷酸激酶、胞苷酸激酶、鸟苷酸激酶、核苷二磷酸激酶和乙酸激酶的基因分别异源表达至大肠杆菌中，再经诱导培养、超声破碎、离心取上清、...

【技术特征摘要】

1.一种酶法合成脱氧核糖核苷三磷酸的方法，其特征在于，将dnmp置于含有激酶酶液的反应体系中进行酶促反应，合成脱氧核糖核苷三磷酸；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解，其酶解反应体系为：10～40g/l鲑鱼精dna，1～10g/l脱氧核糖核酸酶，溶剂为水；所述酶解，其酶解条件为：酶解温度为40～60℃，ph值6.0～8.0，酶解时间为5～12h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的激酶酶液是通过将腺苷酸激酶、胸苷酸激酶、胞苷酸激酶、鸟苷酸激酶、核苷二磷酸激酶和乙酸激酶的基因分别异源表达至大肠杆菌中，再经诱导培养、超声破碎、离心取上清、混合得到。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述腺苷酸激酶，其氨基酸序列如seq idno.1所示，对应的编码基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述胸苷酸激酶，其氨基酸序列如seq idno.3所示，对应的编码基因的核苷酸序列如seq id no.4所示。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述胞苷酸激酶，其氨基酸序列如seq idno....

【专利技术属性】
技术研发人员：应汉杰，陈勇，王金辉，温庆仕，王亦凡，王骏之，刘庆国，
申请(专利权)人：江苏集萃工业生物技术研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：