探针、引物探针组合、试剂盒和核酸检测方法技术

本发明专利技术提供了一种探针、引物探针组合、试剂盒和核酸检测方法，涉及生物技术领域。本发明专利技术提供的探针包括响应序列、媒介子序列和靶核酸特异性结合序列；响应序列的3'端与媒介子序列的5'端相连或者不相连；媒介子序列的3'端与靶核酸特异性结合序列的5'端相连；响应序列从5'端至3'端依次包括区域3、区域4和区域1；区域3和区域4完全或者部分互补结合；区域3和区域4分别修饰有荧光基团或淬灭基团，互补结合后荧光淬灭；媒介子序列的3'端序列与区域1反向互补，在靶核酸特异性结合序列水解后，媒介子序列与区域1互补结合，并用于在5'‑3'聚合酶活性下沿响应序列进行延伸。该探针成本低，用于靶核酸检测的灵敏度好，准确性高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种探针、引物探针组合、试剂盒和核酸检测方法。

技术介绍

1、专利ep 1746172 a2提供了一种鉴定靶核酸序列的方法，采用探针靶标依赖的不对称pcr方法实现熔解曲线分析，但缺点是探针上如果存在突变会导致tm值的变化，进而影响结果的判定；专利cn102959092 b和cn 102449167 b分别提供了一种核酸的检测方法，均采用探针不依赖靶标的熔解曲线技术，解决了探针序列上有突变影响结果判定的问题，然而与传统实时pcr法相比，探针设计更复杂，剪切后的pto或媒介子序列作为扩增引物并进行后续的扩增和熔解曲线分析，需要引入cto或类似荧光标记的片段，荧光标记长，带来合成成本高和荧光信号本底高等问题，难以高效的实现产品开发；专利cn 117701557 a提供了一种基于熔解曲线分析的核酸多重检测方法，与专利cn102959092b、cn 102449167 b主要区别是媒介探针中猝灭基团的修饰免去了媒介子以信号探针为模板的延伸步骤，但未解决本底信号高、引物、探针条数多带来设计复杂和成本高等问题。

<p>2、因此，有必要本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.探针，其特征在于，包括响应序列、媒介子序列和靶核酸特异性结合序列；所述响应序列的3'端与媒介子序列的5'端相连或者不相连；所述媒介子序列的3'端与靶核酸特异性结合序列的5'端相连；

2.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述靶核酸特异性结合序列的长度为10-80nt；

3.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述区域3和区域4之间还包括Linker1，所述区域1的3'端还连接有Linker2；

4.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述区域3的5'端第1-10位碱基上修饰有荧光基团或者淬灭基团；所述区域4的3'端第1-10位碱基上修饰有荧...

【技术特征摘要】

1.探针，其特征在于，包括响应序列、媒介子序列和靶核酸特异性结合序列；所述响应序列的3'端与媒介子序列的5'端相连或者不相连；所述媒介子序列的3'端与靶核酸特异性结合序列的5'端相连；

2.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述靶核酸特异性结合序列的长度为10-80nt；

3.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述区域3和区域4之间还包括linker1，所述区域1的3'端还连接有linker2；

4.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述区域3的5'端第1-10位碱基上修饰有荧光基团或者淬灭基团；所述区域4的3'端第1-10位碱基上修...

【专利技术属性】
技术研发人员：付常铸，常富江，付嘉祎，
申请(专利权)人：付常铸，
类型：发明
国别省市：