一种用于生产高质量重组腺相关病毒的Cap和Rep蛋白双重调控系统及其构建方法技术方案

本发明专利技术公开了一种用于生产高质量重组腺相关病毒的Cap和Rep蛋白双重调控系统及其构建方法。本发明专利技术双重调控系统包括Rep2‑off蛋白表达系统和Cap‑on蛋白表达系统，其中Cap‑on蛋白表达系统通过小分子化合物米非司酮的添加，实现了Cap蛋白的延迟表达；Rep‑off蛋白表达系统则通过添加四环素关闭Rep蛋白的后期表达。本发明专利技术通过构建延迟衣壳蛋白Cap的表达和关闭Rep蛋白的后期表达的双重调控系统，提升了病毒滴度和实心率，进而实现高质量重组腺相关病毒的生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因与细胞治疗药物载体，尤其是涉及一种用于生产高质量重组腺相关病毒的cap和rep蛋白双重调控系统及其构建方法。

技术介绍

1、重腺相关病毒(raav)因其高安全性、广泛的组织嗜性和持久的基因表达特性，在基因治疗领域占据重要地位。作为一种非致病性病毒，raav能够实现多种组织的高效转导。例如，aav8和aav9在肝脏和心脏组织中表现优异，而aav10在中枢神经系统中具有较高的侵染效率。此外，raav载体因其能够长期表达治疗基因且不整合至宿主染色体的特性，已被成功应用于多种疾病的治疗，如治疗脊髓性肌萎缩症的zolgensma和治疗遗传性眼疾的luxturna。

2、目前，三质粒共转染hek293细胞最常用的商业化raav生产方式。该方法通过将含有目标基因的质粒(p-goi)、辅助质粒(phelper，提供腺病毒辅助功能)和包装质粒(prepcap，含aav cap衣壳蛋白和rep蛋白)共转染hek293细胞，从而生产含有治疗基因的raav载体。尽管这种方法操作相对简单，适合小规模实验室制备，但仍存在一些缺陷，包括生产效率较低、空壳病本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种Cap和Rep蛋白双重调控系统，其特征在于，所述双重调控系统包括Rep2-off蛋白表达系统和Cap-on蛋白表达系统；所述Rep2-off蛋白表达系统表达Rep2蛋白，通过添加四环素关闭Rep蛋白的表达；所述Cap-on系统表达Cap蛋白，通过添加米非司酮启动Cap蛋白的表达。

2.根据权利要求1所述的双重调控系统，其特征在于，所述Rep2-off蛋白表达系统的构建方法包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的双重调控系统，其特征在于，所述Rep2-off载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Rep2-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示...

【技术特征摘要】

1.一种cap和rep蛋白双重调控系统，其特征在于，所述双重调控系统包括rep2-off蛋白表达系统和cap-on蛋白表达系统；所述rep2-off蛋白表达系统表达rep2蛋白，通过添加四环素关闭rep蛋白的表达；所述cap-on系统表达cap蛋白，通过添加米非司酮启动cap蛋白的表达。

2.根据权利要求1所述的双重调控系统，其特征在于，所述rep2-off蛋白表达系统的构建方法包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的双重调控系统，其特征在于，所述rep2-off载体的核苷酸序列如seq id no.1所示；所述rep2-f的核苷酸序列如seq id no.3所示；所述rep2-r的核苷酸序列如seq id no.4所示。

4.根据权利要求1所述的双重调控系统，其特征在于，所述cap-on蛋白表达系统的构建方法包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的双重调控系统，其特征在于，步骤(1)中，所述pswitch-f的核苷酸序列如seq id no.5所示；所述pswitch-r的核苷酸序列如seq id no.6所示。

6.根据权利要求4所述的双重调控系统...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂简琪，任和，宋紫川，白仲虎，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：