一种冰冻组织的CUT&Tag建库方法技术

本发明专利技术实施例公开了一种冰冻组织的CUT&Tag建库方法。所述方法包括：提核，甲醛交联，终止交联；细胞核与ConABeads孵育、一抗孵育，二抗孵育；Tn5酶孵育，Tn5酶打断；解交联；DNA提取，PCR扩增与纯化；文库浓度测定。本发明专利技术对甲醛解交联的条件进行了研究，所提供的冰冻组织CUT&Tag建库方法具有高测序深度和覆盖度、高质量和数量的峰、低背景噪音、高重复性和特异性，进而提高数据的可靠性和科学价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术实施例涉及生物，具体涉及一种冰冻组织的cut&tag建库方法。

技术介绍

1、cut&tag是继chip技术之后更新一代的检测组蛋白(也可以是转录因子等其他蛋白质)与dna互作的技术，其主要是利用抗体靶向目标蛋白，然后通过融合蛋白(如pa-tn5)在目标蛋白结合的dna区域进行切割和加标签，后续通过高通量测序来鉴定蛋白质结合的dna位点，具有高分辨率、低背景和高灵敏度等优点。

2、哺乳动物活细胞具有完整的细胞结构和生理状态，能够保证目标蛋白与dna正常的相互作用。在活细胞中，蛋白质的定位、构象以及其与dna的结合模式等都处于自然状态，cut&tag技术可以很好地捕捉到这些真实的相互作用情况。另外，cut&tag技术依赖于酶(如tn5转座酶)的活性来进行dna的切割和加标签操作。哺乳动物活细胞提供了适宜的生理环境，包括合适的温度(37℃左右)、ph值(约7.4)和离子浓度等，能够保证酶发挥最佳活性。在这样的条件下，tn5转座酶可以高效地工作，准确地在目标蛋白-dna结合区域进行操作。</p>

3、实验本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种冰冻组织的CUT&Tag建库方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的冰冻组织的CUT&Tag建库方法，其特征在于，所述提核步骤中使用的裂解液包括体积比为1：1的裂解缓冲液和裂解稀释缓冲液，其中，

3.根据权利要求1所述的冰冻组织的CUT&Tag建库方法，其特征在于，

4.根据权利要求1所述的冰冻组织的CUT&Tag建库方法，其特征在于，

5.根据权利要求1所述的冰冻组织的CUT&Tag建库方法，其特征在于，

6.根据权利要求1所述的冰冻组织的CUT&Tag...

【技术特征摘要】

1.一种冰冻组织的cut&tag建库方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的冰冻组织的cut&tag建库方法，其特征在于，所述提核步骤中使用的裂解液包括体积比为1：1的裂解缓冲液和裂解稀释缓冲液，其中，

3.根据权利要求1所述的冰冻组织的cut&tag建库方法，其特征在于，

4.根据权利要求1所述的冰冻组织的cut&tag建库...

【专利技术属性】
技术研发人员：张凤云，曾雪芮，陈勇璇，宿兵，
申请(专利权)人：中国科学院昆明动物研究所，
类型：发明
国别省市：