一种生产表面活性素的基因精简枯草芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种生产表面活性素的基因精简枯草芽孢杆菌及其应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术通过分析鉴定影响枯草芽孢杆菌发酵生产表面活性素的不良性能，确定了非必需基因的种类。因此在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168的基础上，先整合磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶(sfp)基因恢复宿主菌的表面活性素生产能力；然后通过对生物膜合成途径、代谢副产物途径、孢子生成、蛋白酶系、鞭毛生成五个方面的基因(簇)精简。菌株EX10在进行精简后，发酵表现得到了优化，发酵产量最高达到了11.2g/L，较原始菌株提高了2.1倍。因此，该基因组精简菌株作为工业化高效生产表面活性素的底盘细胞具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生产表面活性素的基因精简枯草芽孢杆菌及其应用，属于基因工程。

技术介绍

1、表面活性素(surfactin)是一种由芽孢杆菌合成的绿色生物表面活性剂。它由一个七肽链和一个含有12至16个碳的长链β-羟基脂肪酸组成。七肽链n端的氨基酸与β-羟基脂肪酸的羧基形成肽键，c端的羧基与β-羟基脂肪酸的羟基形成内酯键，最终形成闭环结构。正因为这种独特的环状结构，而具有强表面活性、抗菌活性、乳化性和生物可降解性，在石油开采、医药、食品、日化等领域拥有广泛的应用前景。

2、基因组精简工程主要在原核细胞中进行，分析枯草芽孢杆菌的基因组发现，存在大量的孤岛基因、冗余基因、假基因等非必需基因，以及控制次级代谢产物合成的基因，这大大增加了细胞代谢负担和能耗，导致营养资源浪费，进而影响细胞的生长与发酵性能。因此，通过小基因组技术实现底盘细胞的构建，是可行且有价值的，与此同时，基因精简还可能带来例如更高的生物量、更强的产物生产能力和更优秀的工业化适应性。

3、枯草芽孢杆菌能作为公认安全(gras)的菌株，许多种类芽孢杆菌及其代谢产物已广泛应用本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生产表面活性素的基因精简枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述基因精简枯草芽孢杆菌相对于宿主菌包括以下改造：

2.根据权利要求1所述的基因精简枯草芽孢杆菌，其特征在于，

3.根据权利要求1所述的基因精简枯草芽孢杆菌，其特征在于，4-磷酸泛酰巯基乙氨转移酶编码基因的整合位点包括基因组上的解淀粉酶基因amyE处。

4.根据权利要求1所述的基因精简枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述4-磷酸泛酰巯基乙氨转移酶编码基因由组成型启动子或诱导型启动子启动表达；

5.根据权利要求1所述的基因精简枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述4-磷酸泛酰巯基乙氨转移酶编码基因位...

【技术特征摘要】

1.一种生产表面活性素的基因精简枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述基因精简枯草芽孢杆菌相对于宿主菌包括以下改造：

2.根据权利要求1所述的基因精简枯草芽孢杆菌，其特征在于，

3.根据权利要求1所述的基因精简枯草芽孢杆菌，其特征在于，4-磷酸泛酰巯基乙氨转移酶编码基因的整合位点包括基因组上的解淀粉酶基因amye处。

4.根据权利要求1所述的基因精简枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述4-磷酸泛酰巯基乙氨转移酶编码基因由组成型启动子或诱导型启动子启动表达；

5.根据权利要求1所述的基因精简枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述4-磷酸泛酰巯基乙氨转移酶编码基因位于全基因组序列nc_009725.2上的第373165-373839位。

6.权利要求1-5任一项所述的基因精简枯草芽孢杆菌的构建...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏小乐，高玲，杜昆，王国昇，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：