基本上无普伐他汀内酯和表普伐他汀的普伐他汀钠和包含普伐他汀钠的组合物制造技术

本发明专利技术提供了基本上无普伐他汀内酯和表普伐他汀的普伐他汀钠，表普伐他汀为普伐他汀的Ｃ－６差向异构体。本发明专利技术进一步提供了从发酵肉汤中以高纯度回收普伐他汀钠的新方法。该方法包括通过萃取形成化合物的溶液，从溶液中得到普伐他汀铵盐，纯化该化合物的铵盐，并置换该化合物的盐至普伐他汀钠的步骤。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
有关申请的交叉引用本申请根据35 U.S.C.119(e)要求以2000年10月5日申请的美国临时申请No.60/238,276为优先权，该申请在此引入作为参考。普伐他汀为化合物]-1，2，6，7，8，8a-六氢-β，δ，6-三羟基-2-甲基-8-(2-甲基-1-氧代丁氧基)-1-萘-庚酸的普通药物名(CAS登记号为81093-370)。普伐他汀的分子结构由式(Ia)表示，其中R＝OH。内酯形式由式(Ib)表示，其中对原子加以标记以表示原子的编号。 普伐他汀，可杷汀(式Ia，R＝H)，洛伐他汀(式Ia，R＝CH3)，西伐他汀，氟伐他汀和阿托伐他汀各自具有一个以羧基为端基的烷基链，且在相对于羧酸基的β和δ位带有两个羟基。羧基和在δ位的羟基容易如式(Ib)所示内酯化。可内酯化的化合物例如抑制素可以以游离酸形式或内酯形式，或以两种形式的平衡混合物形式存在。内酯化作用导致抑制素药物制造中的加工困难，因为化合物的游离酸和内酯形式具有不同的极性。纯化一种形式的方法可能将另一种形式与杂质一起除去，而导致收率降低。因此，为了以高收率分离可内酯化的化合物，在处理时必须非常小心。目前最经济可行的普伐他汀制造方法是通过在可杷汀的C-6位的微生物羟化进行的。尽管酶催化工艺是高度立体选择性的，但对于所获得的普伐他汀钠常见的是，在从发酵肉汤中分离后被大量的普伐他汀C-6差向异构体(″表普伐他汀(epiprava)″)所污染。C-6位为双烯丙基，因此C-6位原子易于差向异构化。为了将差向异构作用减到最少，需要小心地控制普伐他汀分离期间的pH值及其它条件。由发酵肉汤分离普伐他汀的已知方法既不合适于以普伐他汀钠盐的形式分离普伐他汀，也不合适于制造被大量普伐他汀内酯和/或表普伐他汀(epiprava)污染的普伐他汀钠。本专利技术满足本领域的需要，提供了一种由发酵肉汤以高纯度、高收率、在制备级规模以及无需色谱纯化来分离普伐他汀钠的有效方法。该方法的一种优选实施方案包括由含水的发酵肉汤中将普伐他汀萃取到有机溶剂中，反萃取普伐他汀至碱性水溶液中，并再萃取至有机溶剂中，得到相对于发酵肉汤中普伐他汀的起始浓度被富集了的普伐他汀有机溶液。普伐他汀可以从富集了的溶液中通过以其铵盐形式沉淀而后通过重结晶提纯该铵盐来获得。然后将重结晶的盐置换成普伐他汀钠盐的形式，并用离子交换树脂清除过量的钠离子。然后可以将普伐他汀钠盐通过重结晶，冷冻干燥或其它方式从溶液中以高纯态分离出来。专利技术的详细说明本专利技术提供了基本上无普伐他汀内酯和表普伐他汀的普伐他汀钠，和由发酵肉汤中以高纯度分离普伐他汀钠的后续方法。可杷汀的酶催化羟化用于分离普伐他汀的酶催化羟化的肉汤可以为任何已知的工业规模发酵的可杷汀肉汤水溶液，例如美国专利5,942,423和4,346,227中所述方法的肉汤。优选，酶催化羟化可用Steptomyces的活培养物与可杷汀和葡萄糖的营养混合物进行。如果肉汤在发酵完成后为中性或碱性，那么向其加入酸将肉汤pH值调至约1到6之间，优选1和5.5之间，且更优选在2到4之间。可以使用的酸包括盐酸，硫酸，三氟乙酸或任何其它质子酸，优选具有小于1的pH值的酸，以1M水溶液的形式。发酵肉汤的酸化将肉汤中的任何普伐他汀羧酸酯盐转化为游离酸和/或内酯。基本上纯的普伐他汀钠的分离普伐他汀首先从在相对高浓缩的有机溶液中的含水发酵肉汤通过一系列萃取和反萃取步骤获得。在第一步中，从发酵肉汤中提取普伐他汀。C2-C4烷基甲酸和C2-C4羧酸的C1-C4烷基酯能够有效地从含水发酵肉汤中提取出普伐他汀。烷基基团可以是直链、支链或环状的。优选的酯包括甲酸乙酯，甲酸正丙酯，甲酸异丙酯，甲酸正丁酯，甲酸仲丁酯，甲酸异丁酯，甲酸叔丁酯，乙酸甲酯，乙酸乙酯，乙酸正丙酯，乙酸异丙酯，乙酸正丁酯，乙酸仲丁酯，乙酸异丁酯，乙酸叔丁酯，丙酸甲酯，丙酸乙酯，丙酸正丙酯，丙酸异丙酯，丙酸丁酯，丁酸甲酯，丁酸乙酯，丁酸正丙酯，丁酸异丙酯，丁酸丁酯，异丁酸甲酯，异丁酸乙酯，异丁酸丙酯和异丁酸丁酯。在这些优选的有机溶剂中我们发现乙酸乙酯，乙酸异丁酯，乙酸丙酯和甲酸乙酯是特别适合的。最优选的萃取溶剂为乙酸异丁酯。可以用其它有机溶剂代替酯。可以使用卤代的卤化烃，芳香化合物，酮和醚，例如二氯甲烷，氯仿，四氯化碳，1，2-二氯乙烷，苯，丁基甲基酮，乙醚和甲基叔丁基醚。将普伐他汀任选地反萃取到pH值约8.0到约9.5的碱性水溶液中。优选碱为NaOH，NH4OH或KOH，最优选NaOH。最好将萃取溶剂与碱性水溶液接触，直到普伐他汀在有机相中的量已经基本上耗尽，可通过薄层色谱法测定或任何其它方法确定，包括主观判断完全萃取时已经发生了足够的接触。为了得到最佳收率可以进行多次反萃取。然而，当有机相为乙酸异丁酯时一次反萃取就是高效的。反萃取可通过使用小于有机萃取液的体积的碱水溶液用于浓缩普伐他汀。优选，用小于三分之一有机萃取液体积的碱性水溶液体积来进行反萃取，更优选，用小于四分之一有机萃取液体积的碱性水溶液，且最优选用约小于五分之一有机萃取液体积的碱性水溶液体积来进行反萃取。优选将水溶液用酸酸化，优选用三氟乙酸，盐酸，硫酸，乙酸，或磷酸，更优选硫酸，酸化至pH值约1.0到约6.5，更优选约2.0到约3.7。优选将普伐他汀再萃取至先前所描述的适合于从发酵肉汤中萃取普伐他汀的有机溶剂的一种之中。有机溶剂可以是，但不必是，与从发酵肉汤中萃取普伐他汀所使用的相同溶剂。在此再萃取中，普伐他汀的进一步富集可以通过再萃取至优选小于约50％(v/v)水提取物的量的有机溶剂，更优选约33％(v/v)到约20％(v/v)，且更加优选约25％(v/v)水提取物的量的有机溶剂中来实现。普伐他汀可以从100L发酵肉汤中以89％的收率从初始的有机萃取液中浓缩至8L富集的有机溶液。本领域技术人员将完全了解可以通过进行多次提取来获得较高收率的纯化普伐他汀，其中已经在实际应用本专利技术的优选方式中描述了只有单次萃取的情况。该优选的方式实现了节约溶剂和高产品产率的平衡。离开此优选的方式而进一步通过反复进行萃取来进一步提高收率，其中仅仅有一次萃取已经如以上所描述，未必是背离了本专利技术的实质。在通过“盐析”从富集的有机溶液中得到普伐他汀之前，优选将富集的有机溶液干燥，干燥可使用常规的干燥剂例如MgSO4，Na2SO4，CaSO4，二氧化硅，珍珠岩等等进行，且任选地用活性碳脱色。然后优选将干燥和/或脱色了的富集的有机溶液常规分离，例如通过过滤或倾析。在下一步中，可以从富集的有机溶液中用氨或胺以盐析出普伐他汀。胺可以是伯、仲或叔胺。可以使用任何烷基或芳基胺，只要其位阻不是太大以至于阻止了胺中的氮与普伐他汀的羧基的离子相互作用就可以。胺包括，但不局限于，甲基，二甲基，三甲基，乙基，二乙基，三乙基及其它C1-C6伯、仲和叔胺；且进一步包括吗啉，N-甲基吗啉，异丙基环己基胺，哌啶等等。无论在氮上没有、存在或有多重取代，由氨或胺反应形成的盐在下文中都被称为铵盐。其含义是意图包括胺的盐以及氨的盐。普伐他汀的铵盐沉淀还可以通过单独添加铵盐或与氨或胺结合一起加入铵盐来诱导。优选的铵盐为下面的氨的盐NH4Cl，NH4Br，NH4I，(NH4)2SO4，NH4NO3，(NH4)3PO4，(NH4)本文档来自技高网...

【技术保护点】
基本上纯的普伐他汀钠。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：V克里，L德克，I福尔加克斯，C绍博，AE纳吉尼，
申请(专利权)人：拜奥盖尔药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：HU[匈牙利]