本发明专利技术公开了一种三七皂甙免疫佐剂及含有该佐剂的疫苗制剂。本发明专利技术还涉及该皂甙的制备方法，以该皂甙为免疫佐剂的疫苗制剂，以及本发明专利技术三七皂甙在疫苗制备方面的用途。三七皂甙作为免疫佐剂能显著增强疫苗的免疫原性，毒性很小，对机体免疫功能有广泛的调节作用，免疫佐剂性效果优于Ｑｕｉｌ－Ａ和至今唯一人用的免疫佐剂氢氧化铝胶，同时也可以用作免疫治疗剂。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种三七皂甙免疫佐剂及含有该佐剂的疫苗制剂。更具体地，本专利技术涉及一种从五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根中分离得到的皂甙，一种含有该皂甙作为免疫佐剂的疫苗制剂，一种增强对抗原的免疫应答的方法，该方法采用一包含该皂甙和一第二佐剂的佐剂组合物。
技术介绍
近年来，随着免疫学基础理论研究的深入，以及抗原提纯技术和基因工程技术的迅速发展，出现了多种DNA重组疫苗、合成肽疫苗等。这些新型疫苗具有纯度高、分子量小、特异性强，安全性好等优点。但迄今为止，开发成功的相关疫苗却为数甚少。其原因主要是纯化后的抗原免疫原性弱，单独使用难以诱导机体产生有效的免疫应答。解决这一关键问题的有效途径是使用佐剂(O`Hagan DT，Mackichan ML，Singh M.Biomolecular Engineering 2001；1869-85)。自20年代Glenny应用氢氧化铝(明矾)作为免疫佐剂以来，铝胶佐剂因其低毒性而仍是至今唯一通过FDA批准的能用于人的佐剂。但其存在一些无法克服的缺点(1)对人免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、单纯疱疹病毒(HSV)、流感病毒以及吸血虫病、百日咳和伤害的抗原无免疫佐剂性效果(Scanhez P，et al.Journal of Immunology，141，1720-1727(1988)James SL，et al.JImmunol，140，2753-2759(1988)；Edelman R，Reviews of infective disease，2，370-383(1980))；(2)铝胶制备过程，质量标准难以标化；(3)只能诱导体液免疫，不能诱导细胞介导免疫反应，远远不能满足新型疫苗发展的要求(O’Hagan DT，Mackichan ML，Singh M.Biomolecular Engineering 1869-85(2001)；Gupta RK.Advanced Drug Delivery Reviews 32155-172(1998))。为此，近年来各国科研工作者为寻找新的棉衣佐剂开展了广泛研究，并取得了一定进展。目前研究报道的免疫佐剂种类很多，但由于存在不同程度的毒副作用或安全隐患等一些不可避免的缺点，限制了它们的实际应用因此，迫切需要开发安全、高效的新型免疫佐剂。皂甙(saponin)是中草药中一类重要的生物活性成分。最近证明从南美的Quillaja saponaria Molina树皮中分离得到的皂树皂甙具有免疫佐剂活性(EspinetEG.Gac Vet，74，1-13(1951)；Dalsgaard K.Bull of Int Epiz，77，1289-1295(1972)；Morein B.Nature，322，287-288(1988))。大量研究结果表明Quil A为目前唯一对外源性抗原既能刺激Th1免疫应答，又能诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答的佐剂(Kensil CR，et al..J Immunol，146，431-7(1991)；Van setten DC，et al..Adv Exp Med Biol，404，185-93(1996)；Nord LI，et all.Carbohydr Res，320，70-81(1999)；Takahashi H，et all.Nature，344，873-5(1990)；Wu JY，et al..J Immunol，148，1519-25(1992)。这一独特特性使其成为亚单位疫苗、细胞内寄生病原体疫苗及癌症疫苗的理想佐剂。一种皂树皂甙的提纯形式以“Quil-A”的品名出售(Iscotec AB，瑞典；Superfos Biosector a/s，Frydenlundsvei 30，DK-Vedbaek，丹麦)。然而，Quil A存在严重的毒副作用，可引起溶血、局部组织坏死，甚至全身不良反应、中毒。其对小鼠致死量为100～125μg，引起50％溶血浓度为10μg/ml，因此，Quil-A用在人用药物制剂中是不安全的(Hersten等，InfectImmun，56，432-438(1988)。这严重阻碍了其推广应用。目前Quil A除了用于为某些绝症设计的疫苗如癌症疫苗、HIV重组疫苗外，仍主要限用于兽用疫苗。因此，寻找筛选无毒、安全的皂甙佐剂成为当前佐剂研究中的一个热点(SantosWR，等，Vaccine，15，1024-29(1997))。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于疫苗时具有高佐剂活性的无毒的皂甙；本专利技术的另一个目的是提供一种包含所述皂甙作为佐剂的疫苗制剂；本专利技术还有一个目的是提供所述皂甙和复合免疫佐剂在疫苗制备中的应用。疫苗免疫佐剂——三七皂甙是从五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根中提取、分离得到的总皂甙。疫苗制剂包括抗原、作为免疫佐剂的三七皂甙或三七皂甙和一种第二佐剂的复合免疫佐剂。三七皂甙作为免疫佐剂在疫苗制备中的应用。本专利技术的三七皂甙具有毒性及溶血性小。其对小鼠的腹腔注射LD50为825.6(730.7-934.8)mg/kg；引起兔红细胞50％溶血浓度大于500μg/ml。三七皂甙与抗原单独使用时显示出比现有技术中已知的Quil-A能诱导机体产生更高的细胞免疫应答和体液免疫应答。疫苗制剂中的抗原不受任何特定抗原族的限制，其包括B型肝炎病毒表面抗原、HIV和HCV抗原，等等。在本专利技术的制剂中抗原的浓度可根据各种因素调节，例如抗原种类、所需的抗原性水平、接种对象的特异性及所需的免疫程度。该制剂还可包括含有治疗有效量的作为免疫佐剂的三七皂甙，以及含有一种或多种药学上可接受的载体的组合物。疫苗制剂可以口服、鼻吸入、直肠、肠胃外或经皮给药的方式施用于需要接种的对象。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊籍、丸剂、缓释微丸、固体分散体、包含物等，制成的液体制剂如混悬剂、乳剂、溶胶剂、糖浆剂、合剂、溶液剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性混悬剂、乳剂、脂质体、微囊、微球、毫微粒等。优先的形式是注射剂和微丸。附图说明图1为三七皂甙(PNS)体外对分裂原诱导小鼠脾细胞增殖反应的影响；图2为三七皂甙(PNS)对分裂原诱导OVA免疫小鼠脾细胞增殖反应的影响(*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.01 vs OVA对照组)；图3为三七皂甙(PNS)对OVA免疫小鼠血清中特异性IgG，IgG1和IgG2b抗体水平的影响(*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.01 vs OVA对照组；(ap＜0.05，aap＜0.01，aaap＜0.01 vs Alum/OVA组和Quil-A/OVA组)。具体实施例方式本专利技术的三七皂甙是从五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根中分离得到、无毒，而且单独使用或与另一种佐剂例如铝胶联合使用时显示出高免疫佐剂活性。从五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根中分离三七皂甙的制备方法，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种疫苗免疫佐剂－三七皂甙，其特征在于是从五加科植物三七Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ．）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ的干燥根中提取、分离得到的总皂甙。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙红祥，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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