一种表达嵌合抗原受体的细胞的制备方法技术

本发明专利技术提供一种表达嵌合抗原受体的细胞的制备方法，包括：(1)使细胞与激活剂接触进行激活；(2)将细胞与编码CAR的核酸分子接触，所述编码CAR的核酸分子在非病毒载体上，获得包含所述核酸分子的细胞；(3)收获细胞。其中，步骤(3)在步骤(1)开始后不晚于72小时。与通过其他类似方法制备的细胞相比，步骤(3)的细胞显示更高的CAR阳性率、更高比例的未分化细胞表型、更低的耗竭型细胞比例和更强的扩增能力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫细胞治疗，更具体地涉及一种表达嵌合抗原受体的细胞的制备方法。

技术介绍

1、嵌合抗原受体(car)是一种基因重组受体，嵌合抗原受体一般包括细胞外抗原结合域、跨膜结构域与胞内信号传导结构域，可以转导到不同的免疫细胞中，如t淋巴细胞和nk细胞。car-t细胞已有多款产品上市，用于治疗血液瘤。

2、car-t产品目前面临主要的技术问题为：car-t采用自体细胞制备，制备过程繁琐且周期长，导致成本较高；car-t产品多采用病毒载体，产品受限于病毒载体的产量和质量，也会导致成本剧增；car-t注射到人体中，由于培养时间较长，分化程度较高，会存在明显的t细胞耗竭。

3、为了解决上述问题，快速car-t制备是目前尝试的一种方向，通过缩短制备周期，从14天缩短为2天或更短，降低t细胞扩增和分化，提高car-t细胞在人体内的扩增潜能。快速car-t可以大幅缩短周期，降低成本，并使car-t细胞在人体内作用更持久。诺华、亘喜公司已有基于病毒载体制备快速car-t制备技术，尚未报道使用非病毒载体制备快速car-t细胞。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种表达嵌合抗原受体的细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：(1)使细胞与激活剂接触进行激活；(2)将细胞与编码CAR的核酸分子接触，所述编码CAR的核酸分子在非病毒载体上，以将所述核酸分子引入细胞；(3)收获细胞；

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述编码CAR的核酸分子为DNA，所述非病毒载体为质粒载体；

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述非病毒载体为含有转座子的质粒载体，所述转座子包含编码CAR的核酸分子，所述步骤(2)细胞还与转座酶或编码转座酶的核酸分子接触；

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所...

【技术特征摘要】

1.一种表达嵌合抗原受体的细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：(1)使细胞与激活剂接触进行激活；(2)将细胞与编码car的核酸分子接触，所述编码car的核酸分子在非病毒载体上，以将所述核酸分子引入细胞；(3)收获细胞；

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述编码car的核酸分子为dna，所述非病毒载体为质粒载体；

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述非病毒载体为含有转座子的质粒载体，所述转座子包含编码car的核酸分子，所述步骤(2)细胞还与转座酶或编码转座酶的核酸分子接触；

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述引入采用电穿孔。

5.如权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述激活剂为刺激cd3/tcr复合物的药剂和/或与刺激细胞表面上共刺激分子的药剂；

6.如权利要求1-5任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)的细胞还至少满足如下①-⑤任一条件：

7.如权利要求1-6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，将所述核酸分子引入细胞之后，无培养细胞的步骤；

8.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙丹，赵伟，孙艳，钱其军，
申请(专利权)人：上海细胞治疗集团药物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：