一种重组透明质酸酶纯化方法及生产方法技术

技术编号:45304329 阅读:28 留言:0更新日期:2025-05-16 14:43
本申请涉及一种重组透明质酸酶纯化方法及生产方法。该纯化方法包括:收集含目的重组透明质酸酶的细胞培养液,澄清处理后收集上清液;将上清液依次进行阴离子交换层析、阳离子交换层析和疏水层析。本申请采用阳离子交换层析替代复合层析和亲和层析,避免复合层析采用羟基磷灰石填料所带来的使用寿命短、装柱困难等问题及亲和层析所带来的无法有效分离目标蛋白与杂质等问题;将阳离子交换层析设置成位于阴离子交换层析之后、疏水层析之前,即将疏水层析调整至末位,避免疏水层析后阳离子层析上样过程中对样品进行高倍数稀释所带来的上样时间长,稀释倍数不够导所致的目标蛋白未完全吸附于填料上,分离不理想,蛋白收率和成品纯度较低等问题。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物,具体涉及一种重组透明质酸酶纯化方法及生产方法


技术介绍

1、透明质酸酶(hyaluronidase,haase)是指能够将透明质酸(hyaluronan或hyaluronic acid,ha)及部分糖胺聚糖(glycosaminoglycan,gag)降解成二糖或小分子寡糖的一类糖苷酶。透明质酸酶可作为药物扩散剂,降解人体组织的透明质酸以增加其通透性,促进注射液的扩散,可用于制备有生物活性的低分子量聚胺寡糖,也可用于降解动物皮革组织的糖胺聚糖,替代传统皮革制备工艺中石灰法,以降低环境污染。

2、目前,已批准上市的透明质酸酶产品为动物源透明质酸酶或人工重组透明质酸酶(以下简称重组透明质酸酶)。然而,动物源透明质酸酶受制于其来源及纯化途径,且存在过敏,病毒污染等潜在风险,在免疫原性、纯度、安全性等方面均劣于重组透明质酸酶。相较于动物源透明质酸酶,重组透明质酸酶具有免疫原性高、无副作用、纯度高、活性高、稳定性强、无外源性污染等优点。

3、相关技术中,重组透明质酸酶的纯化普遍采用包括阴离子交换层析、疏水层析、亲和层析(以苯本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组透明质酸酶纯化方法,其特征在于,所述重组透明质酸酶纯化方法包括以下步骤:

2.如权利要求1所述的重组透明质酸酶纯化方法,其特征在于,进行所述阴离子交换层析时所用填料为键合有三甲胺基烷基季铵基团的琼脂糖微球。

3.如权利要求2所述的重组透明质酸酶纯化方法,其特征在于,所述阴离子交换层析过程中,酶活载量小于1.8×105U/mL;

4.如权利要求3所述的重组透明质酸酶纯化方法,其特征在于,所述阴离子交换层析过程中,以pH为7.2-7.8的缓冲液作为平衡液,以含氯化钠且pH为7.2-7.8的缓冲液作为洗脱液,平衡液与洗脱液呈线性洗脱方式进行洗脱。...

【技术特征摘要】

1.一种重组透明质酸酶纯化方法,其特征在于,所述重组透明质酸酶纯化方法包括以下步骤:

2.如权利要求1所述的重组透明质酸酶纯化方法,其特征在于,进行所述阴离子交换层析时所用填料为键合有三甲胺基烷基季铵基团的琼脂糖微球。

3.如权利要求2所述的重组透明质酸酶纯化方法,其特征在于,所述阴离子交换层析过程中,酶活载量小于1.8×105u/ml;

4.如权利要求3所述的重组透明质酸酶纯化方法,其特征在于,所述阴离子交换层析过程中,以ph为7.2-7.8的缓冲液作为平衡液,以含氯化钠且ph为7.2-7.8的缓冲液作为洗脱液,平衡液与洗脱液呈线性洗脱方式进行洗脱。

5.如权利要求1所述的重组透明质酸酶纯化方法,其特征在于,进行所述阳离子交换层析时所用填料为磺酸酯阳离子交换树脂填料。<...

【专利技术属性】
技术研发人员:焦鹏燕李瑞营胡绪玉
申请(专利权)人:凯惠睿智生物科技上海有限公司
类型:发明
国别省市:

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