【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品掺假，尤其涉及基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法。
技术介绍
1、蜂蜜作为一种药食同源的天然甜味物质，具有很高的营养价值和药用价值，特别是优质特色蜂蜜深受消费者的认可和青睐。
2、“殷家坪蜂蜜”是一种特色蜂蜜，其汇集高山野生植物特别是大量的中草药花蕊之精华，营养活性成分丰富。“殷家坪蜂蜜”的生产严格遵循古法，沿用“三峡桶”的传统蜂具，秉承农历白露节前后割蜜的习俗，一年只取1次蜜，坚持割脾压榨取蜜的工艺，具有独特的品质和风味，其作为我国优质特色蜂蜜，极具市场价值。
3、现实中，在真蜂蜜中掺入果葡糖浆、淀粉糖浆、大米糖浆进行蜂蜜造假的现象屡见不鲜。由于这些糖浆的果糖和葡萄糖比例与蜂蜜中的成分非常相似，掺入后各项检测指标完全符合国家标准，给检测造成了很大的困难。此外，利用低价其它品种蜂蜜假冒高价蜂蜜的以次充好行为相较于单纯地添加糖浆，更难以鉴别、区分。目前常用于蜂蜜掺假进行鉴定的方法有稳定碳同位素比值分析法(scira)、薄层色谱法(tic)、脉冲电流检测器的高效阴离子交换色谱法(hpaec-pad)、气相色谱质谱联用技术(gc-ms)、高效液相色谱法(hplc)、高效液相同位素质谱仪联用技术(hplc-irms)、核磁共振技术(nmr)以及近红外光谱(nirs)等，现有的方法对于测定蜂蜜掺假或以次充好现象有许多弊端，无法针对性鉴别殷家坪蜂蜜的真伪。
4、因此，建立一种殷家坪蜂蜜鉴别方法十分必要。
技术实现思路
1、有鉴于此，本申请
2、为达到上述技术目的，本申请采用以下技术方案：
3、第一方面，本申请提供一种基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，包括以下步骤：
4、使用uplc-q-tof-ms分别检测殷家坪蜂蜜及已知组蜂蜜，获取殷家坪蜂蜜数据和已知组蜂蜜数据，对殷家坪蜂蜜数据和已知组蜂蜜数据进行预处理后，分别获得殷家坪蜂蜜及已知组蜂蜜的化合物组分；
5、对殷家坪蜂蜜及已知组蜂蜜的化合物组分进行主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析，再通过v+s图筛选殷家坪蜂蜜及已知组蜂蜜的差异代谢物；
6、根据差异代谢物建立pls判别模型；
7、测定待测蜂蜜的差异代谢物，并带入pls判别模型，获取待测蜂蜜的预测值，再根据预设的预测值范围判定待测蜂蜜是否为殷家坪蜂蜜。
8、优选的，uplc-q-tof-ms检测殷家坪蜂蜜及已知组蜂蜜的参数如下：
9、色谱条件：色谱柱为反向色谱柱；流动相：a为0.1%甲酸水溶液（v:v），b为色谱级甲醇；流速为0.3 ml/min；进样量为3 μl；梯度洗脱：0 min，5% b；2 min，5% b；25 min，100%b；26 min，5% b；30 min，5% b；
10、质谱条件：正、负离子模式喷雾电压分别为5500、-4500 v，去簇电压分别为60、-60v；毛细管温度为550℃、鞘气流速为55 arb，辅助气流速为55 arb，全扫描tof ms模式中滞留时间为250 ms，ms/ms模式下滞留时间为70 ms，扫描范围为 m/z50-750。
11、优选的，预处理的过程包括：峰提取、保留时间校正和峰对齐，并利用包括hmdb、massbank和pubchem数据库对化合物组分进行鉴定；所述预处理所用软件为progenesis qi软件。
12、优选的，v+s图筛选差异代谢物的条件为| p[1]|>0.05，| p（corr）[1]|>0.5且vip>2。
13、优选的，还包括将差异代谢物均筛选或确定为特征标志物。
14、优选的，将差异代谢物均确定或筛选为特征标志物的步骤为：将差异代谢物利用hiplot网址绘制热图并从差异代谢物中筛选对应的潜在标志物，再利用spss 27.0软件对潜在标志物绘制roc曲线，并计算auc，选择auc＞0.7的潜在标志物作为特征标志物。
15、优选的，建立pls判别模型的步骤为：选取殷家坪蜂蜜及已知组蜂蜜的部分样本为训练集，赋值训练集中的殷家坪蜂蜜样本及已知组蜂蜜样本的分类变量分别为1和0，以训练集中各蜂蜜样本的差异代谢物为自变量，以分类变量为因变量，建立pls判别模型。
16、优选的，根据预测值范围判定待测蜂蜜是否为殷家坪蜂蜜的步骤为：若0.5<预测值<1.5，则待测蜂蜜为殷家坪蜂蜜，若-0.5<预测值<0.5，则待测蜂蜜为非殷家坪蜂蜜。
17、优选的，已知组蜂蜜包括椴树蜜、洋槐蜜、荆条蜜、苕花蜜、枣花蜜、乌桕蜜、橡胶蜜、油菜蜜中的一种或几种。
18、第二方面，本申请提供一种殷家坪蜂蜜特征标志物，其包括犬尿喹啉酸，脱落酸， d-泛酸，芥子酸，癸二酸，山柰酚葡萄糖醛酸苷，3,4,5-三甲氧基肉桂酸，4-羟基苯甲酸，4-羟基喹啉，丙氨酸-苯丙氨酸中的一种或几种。
19、本申请的有益效果如下：本专利技术基于超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱（uplc-q-tof-ms）的非靶向代谢组学技术，筛选了殷家坪蜂蜜的差异代谢物，并通过受试者工作特征（roc）曲线评估潜在标志物的工作性能，确定了殷家坪蜂蜜的特征标志物，同时利用特征标志物建立殷家坪蜂蜜偏最小二乘（pls）判别模型，通过建立的判别模型对殷家坪蜂蜜的真伪进行有效鉴别，本申请建立的鉴别方法操作简单，步骤少，易上手，可重复性高，检测成本低，分析速度快，准确率高；
20、本专利技术筛选殷家坪蜂蜜特征标志物的方法，依托高通量、高分辨率、高精度的现代分析仪器，对殷家坪蜂蜜的成分可以进行全面、准确的分析，得到的特征标志物用于鉴别殷家坪蜂蜜准确、可靠。
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1.一种基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，所述UPLC-Q-TOF-MS检测殷家坪蜂蜜及已知组蜂蜜的参数如下：
3. 根据权利要求1所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，所述预处理的过程包括：峰提取、保留时间校正和峰对齐，并利用包括HMDB、MassBank和PubChem数据库对化合物组分进行鉴定；所述预处理所用软件为Progenesis QI软件。
4.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，所述V+S图筛选差异代谢物的条件为|p[1]|>0.05，|p（corr）[1]|>0.5且VIP>2。
5.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，还包括将所述差异代谢物均确定或筛选为特征标志物。
6. 根据权利要求5所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，将所述差异代谢物均确定或筛选为特征标志物的步骤为：将所述
7.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，建立PLS判别模型的步骤为：选取所述殷家坪蜂蜜及已知组蜂蜜的部分样本为训练集，赋值训练集中的殷家坪蜂蜜样本及已知组蜂蜜样本的分类变量分别为1和0，以训练集中各蜂蜜样本的差异代谢物为自变量，以所述分类变量为因变量，建立PLS判别模型。
8.根据权利要求7所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，根据预测值范围判定所述待测蜂蜜是否为殷家坪蜂蜜的步骤为：若0.5<预测值<1.5，则待测蜂蜜为殷家坪蜂蜜，若-0.5<预测值<0.5，则待测蜂蜜为非殷家坪蜂蜜。
9.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，所述已知组蜂蜜包括椴树蜜、洋槐蜜、荆条蜜、苕花蜜、枣花蜜、乌桕蜜、橡胶蜜、油菜蜜中的一种或几种。
10.一种基于权利要求1-9任一项所述的方法得到的殷家坪蜂蜜特征标志物，其特征在于，其包括犬尿喹啉酸，脱落酸，D-泛酸，芥子酸，癸二酸，山柰酚葡萄糖醛酸苷，3,4,5-三甲氧基肉桂酸，4-羟基苯甲酸，4-羟基喹啉，丙氨酸-苯丙氨酸中的一种或几种。
...【技术特征摘要】
1.一种基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，所述uplc-q-tof-ms检测殷家坪蜂蜜及已知组蜂蜜的参数如下：
3. 根据权利要求1所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，所述预处理的过程包括：峰提取、保留时间校正和峰对齐，并利用包括hmdb、massbank和pubchem数据库对化合物组分进行鉴定；所述预处理所用软件为progenesis qi软件。
4.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，所述v+s图筛选差异代谢物的条件为|p[1]|>0.05，|p（corr）[1]|>0.5且vip>2。
5.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，还包括将所述差异代谢物均确定或筛选为特征标志物。
6. 根据权利要求5所述的基于代谢组学技术鉴别殷家坪蜂蜜的方法，其特征在于，将所述差异代谢物均确定或筛选为特征标志物的步骤为：将所述差异代谢物利用hiplot网址绘制热图并从所述差异代谢物中筛选对应的潜在标志物，再利用spss 27.0软件对所述潜在标志...
【专利技术属性】
技术研发人员：鲁群，郭梦雪，林聪聪，易梦杰，易尔太，郭道海，刘睿，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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