【技术实现步骤摘要】
本申请属于裸质粒基因治疗药物领域，具体涉及一种大脑外泌体靶向载药系统及其应用。
技术介绍
1、amkp即amp依赖的蛋白激酶，是生物能量代谢调节的关键分子，是研究糖尿病及其他代谢相关疾病的核心。它表达于各种代谢相关的器官中，能被机体各种刺激激活，包括细胞压力、运动和很多激素及能影响细胞代谢的物质。最近的研究表明(milbank e,draganonrv,gonzález-garcía i,et al.small extracellular vesicle-mediated targeting ofhypothalamic ampkαcorrects obesity through bat activation.nat metab.2021；3(10):1415-1431.doi:10.1038/s42255-021-00467-8)，下丘脑中ampk的调节是调节能量平衡的典型机制。ampkα是人类基因表达ampk的一种亚型，抑制了下丘脑中ampkα的表达后，会导致交感神经系统(sns)活性的增加，从而刺激棕色脂肪组织(bat)产热，增加能量消耗，随后导致与进食无关的体重减轻。
2、rna干扰(rnai)可以特异性靶向mrna并在其生物发生前调节其蛋白质的表达，被认为是一种很有前途的治疗工具来操纵疾病相关基因的表达。rnai治疗遇到了许多问题，在临床转化过程中远远低于预期。rnai治疗的发展经历了两个主要阶段。在第一阶段，合成小干扰rna(sirnas)或化学修饰的稳定sirnas，并直接注射进行系统传递；然而，这些s
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术通过将质粒cmv-lamp2b-gfp-sirna中的lamp2b-gfp-sirna基因序列替换为rvg-lamp2b-ampkα-sirna基因序列，rvg-lamp2b-ampkα-sirna中的rvg基因是狂犬病病毒肽基因，具体序列为tacaccatttggatgcccgagaatccgagaccagggacaccttgtgacatt tttaccaatagcagagggaagagagcatccaacggg，狂犬病病毒肽(rvg)可以与外泌体膜蛋白(lamp2b)融合，使得肝脏生产的外泌体膜表面携带狂犬病病毒肽(rvg)，通过血脑屏障到达大脑，sirna呈递的效率也随之增高。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、本专利技术第一方面，提供一种大脑外泌体靶向载药系统，所述载药系统包括质粒cmv-rvg-sira；
4、其中，质粒cmv-rvg-sira包括rvg-lamp2b-ampkα-sirna。
5、质粒(cmv-rvg-sira)在小鼠肝脏产生的外泌体膜表面的lamp2b蛋白与rvg多肽融合；该外泌体通过血液循环可以穿过血脑屏障到达大脑。本质粒在外泌体中的表达产物是ampkα-sirna，可以与小鼠下丘脑神经细胞中的ampkα-mrna互补配对，使ampkα-mrna失效。
6、根据本申请的具体实施方式，所述质粒cmv-rvg-sira的制备方法，包括以下步骤：
7、将质粒cmv-lamp2b-gfp-sirna上的lamp2b-gfp-sirna基因序列替换为rvg-lamp2b-ampkα-sirna基因序列；即得到质粒cmv-rvg-sira；
8、其中，lamp2b-gfp-sirna基因的碱基序列如seq id no.1所示，具体为：5’-tccggaggtgcagaatgggagatgaatttcacaataacatatgaaacta caaaccaaaccaataaaactataaccattgcagtacctgacaaggcgacacacgatggaagcagttgtggggatgaccggaatagtgccaaaataatgatacaatttggattcgctgtctcttgggctgtgaattttaccaaggaagcatctcattattcaattcatgacatcgtgctttcctacaacactagtgatagcacagtatttcctggtgctgtagctaaaggagttcatactgttaaaaatcctgagaatttcaaagttccattggatgtcatctttaagtgcaatagtgttttaacttacaacctgactcctgtcgttcagaaatattggggtattcacctgcaagcttttgtccaaaatggtacagtgagtaaaaatgaacaagtgtgtgaagaagaccaaactcccaccactgtggcacccatcattcacaccactgccccgtcgactacaactacactcactccaacttcaacacccactccaactccaactccaactccaaccgttggaaactacagcattagaaatggcaatactacctgtctgctggctaccatggggctgcagctgaacatcactgaggagaaggtgcctttcatttttaacatcaaccctgccacaaccaacttcaccggcagctgtcaacctcaaagtgctcaacttaggctgaacaacagccaaattaagtatcttgactttatctttgctgtgaaaaatgaaaaacggttctatctgaaggaagtgaatgtctacatgtatttggctaatggctcagctttcaacatttccaacaagaaccttagcttctgggatgcccctctgggaagttcttatatgtgcaacaaagagcaggtgctttctgtgtctagagcgtttcagatcaacacctttaacctaaaggtgcaaccttttaatgtgacaaaaggacagtattctacagcccaggagtgttcgctggatg本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种大脑外泌体靶向载药系统，其特征在于，所述载药系统包括质粒CMV-RVG-SirA；
2.根据权利要求1所述的大脑外泌体靶向载药系统，其特征在于，所述质粒CMV-RVG-SirA的制备方法，包括以下步骤：
3.一种靶向大脑外泌体的药物，其特征在于，采用权利要求1或2所述的大脑外泌体靶向载药系统。
4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，通过尾静脉注射给药。
5.根据权利要求4所述的药物，其特征在于，按照小鼠体重，注射量为1-5mg/kg，1-3天注射一次。
6.一种治疗肥胖的药物，其特征在于，采用权利要求1或2所述的大脑外泌体靶向载药系统。
7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，通过尾静脉注射给药。
8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，按照小鼠体重，注射量为1.5-2.5mg/kg，1-3天注射一次。
9.质粒CMV-RVG-SirA在制备靶向大脑外泌体的药物上的应用。
10.质粒CMV-RVG-SirA在制备治疗肥胖的药物上的应用。
【技术特征摘要】
1.一种大脑外泌体靶向载药系统，其特征在于，所述载药系统包括质粒cmv-rvg-sira；
2.根据权利要求1所述的大脑外泌体靶向载药系统，其特征在于，所述质粒cmv-rvg-sira的制备方法，包括以下步骤：
3.一种靶向大脑外泌体的药物，其特征在于，采用权利要求1或2所述的大脑外泌体靶向载药系统。
4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，通过尾静脉注射给药。
5.根据权利要求4所述的药物，其特征在于，按照小鼠体重，注射量为1-5...
【专利技术属性】
技术研发人员：乌塞，贾丽莎，易洲，肖润，
申请(专利权)人：中国科学院杭州医学研究所，
类型：发明
国别省市：
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