【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及用于生产甜菊醇糖苷的酶和生物催化方法。本公开具体涉及可以将葡萄糖部分从adp-葡萄糖糖供体转移至甜菊醇糖苷的糖基转移酶的用途。
技术介绍
1、过量的糖消耗与世界范围内的健康流行病有关，包括糖尿病和心脏病。医疗保健系统因治疗这些疾病而产生高昂的费用。用低热量、高强度甜味剂代替食品中的添加糖将对健康和经济产生重大影响。
2、甜菊(stevia rebaudiana)物种因其甜叶而广泛种植，在传统上已经用作甜味剂。甜菊提取物的甜度是糖的200-300倍并且在商业上用作高强度甜味剂。甜菊叶的主要糖苷组分是甜菊苷和莱苞迪苷(rebaudioside)。叶中存在大量的十多种不同的甜菊醇糖苷。主要的甜味化合物是甜菊苷和莱苞迪苷a。与甜菊苷相比，莱苞迪苷a (reb a)被认为具有更高的价值，因为其甜味增加且苦味减少。
3、此外，当与reb a相比时，莱苞迪苷m (reb m)的甜味和苦味特征得到改善。然而，reb m在甜菊叶中以非常低的量存在。因此，需要用于将葡萄糖源转化为低级甜菊醇糖苷的改进方法。
【技术保护点】
1.一种工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其包含与选自由SEQ ID NO: 4-517、2和3组成的组的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其包含与选自由SEQ ID NO:4-517、2和3组成的组的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
3.一种工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其具有当通过表8所示的PSSM评分时大于332的得分，其中所述工程化的β-1,3-糖...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其包含与选自由seq id no: 4-517、2和3组成的组的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其包含与选自由seq id no:4-517、2和3组成的组的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
3.一种工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其具有当通过表8所示的pssm评分时大于332的得分，其中所述工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽在评分之前已与seq id no: 2进行了比对。
4.一种工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其具有当通过表9所示的pssm评分时大于54.5的得分，其中所述工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽在评分之前已与seq id no: 2进行了比对。
5.一种工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其具有当通过表10所示的pssm评分时大于58.3的得分，其中所述工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽在评分之前已与seq id no: 2进行了比对。
6.一种多肽，其具有以下序列：
7.如权利要求1-6中任一项所述的多肽，其中所述多肽在宿主微生物中表达。
8.如权利要求7所述的多肽，其中所述宿主微生物是大肠杆菌、酵母属物种、曲霉属物种、毕赤酵母属物种或芽孢杆菌属物种。
9.如权利要求1-8中任一项所述的多肽，其中所述多肽固定至固体支持物。
10.如权利要求9所述的多肽，其中所述固体支持物衍生自纤维素、玻璃、陶瓷、甲基丙烯酸酯、苯乙烯、丙烯酸类、金属氧化物或膜。
11.如权利要求9或10所述的多肽，其中所述多肽通过共价附接、吸附、交联、包埋或包封固定至所述固体支持物。
12.一种用于将糖部分转移至底物甜菊醇糖苷的方法，所述方法包括使β-1,3-糖基转移酶多肽、蔗糖合酶和任选的β-1,2-糖基转移酶多肽与包含一种或多种甜菊醇糖苷、核苷酸二磷酸和蔗糖的起始组合物接触。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述β-1,3-糖基转移酶多肽是工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其包含与选自由seq id no: 4-517、2和3组成的组的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%同一性的氨基酸序列。
14.如权利要求12所述的方法，其中所述蔗糖合酶是工程化的蔗糖合酶，其具有与来源于以下物种的蔗糖合酶具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高序列同一性的多肽序列：喜温嗜酸硫杆菌、欧洲亚硝化单胞菌、嗜醋脱硝弧菌、细长嗜热聚球藻、亚洲栽培稻、拟南芥或小粒咖啡。
15.如权利要求12所述的方法，其中所述β-1,2-糖基转移酶多肽是工程化的β-1,2-糖基转移酶多肽，其具有与来源于以下物种的β-1,2-糖基转移酶多肽具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高序列同一性的多肽序列：大麦、水稻、番茄、枸杞、马铃薯或甜菊。
16.如权利要求12所述的方法，其中
17.如权利要求12所述的方法，其中所述β-1,3-糖基转移酶多肽是工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其具有当通过表8所示的pssm评分时大于332的得分，其中所述工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽在评分之前已与seq id no: 2进行了比对。
18.如权利要求12所述的方法，其中所述β-1,3-糖基转移酶多肽是工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其具有当通过表9所示的pssm评分时大于54.5的得分，其中所述工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽在评分之前已与seq id no: 2进行了比对。
19.如权利要求12所述的方法，其中所述β-1,3-糖基转移酶多肽是工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽，其具有当通过表10所示的pssm评分时大于58.3的得分，其中所述工程化的β-1,3-糖基转移酶多肽在评分之前已与seq id no: 2进行了比对。
20.如权利要求12至19中任一项所述的方法，其中所述底物甜菊醇糖苷包含至少一种选自由以下组成的组的甜菊醇糖苷：甜菊醇、甜菊醇-13-o-葡糖苷、甜菊醇-19-o-葡糖苷、甜茶苷、甜菊醇-1,2-二糖苷、甜菊醇-1,3-二糖苷、甜茶苷、杜尔可苷b、杜尔可苷a、莱苞迪苷b、莱苞迪苷g、甜菊苷、莱苞迪苷c、莱苞迪苷f、莱苞迪苷a、莱苞迪苷i、莱苞迪苷e、莱苞迪苷h、莱苞迪苷l、莱苞迪苷k、莱苞迪苷j、莱苞迪苷m、莱苞迪苷d、莱苞迪苷e2、莱苞迪苷am、莱苞迪苷n、莱苞迪苷o、莱苞迪苷q、其异构体以及合成的甜菊醇糖苷。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述底物甜菊醇糖苷包含甜菊苷和莱苞迪苷a的混合物。
22.如权利要求20所述的方法，其中所述底物甜菊醇糖苷包含甜菊苷。
23.如权利要求20所述的方法，其中所述底物甜菊醇糖苷包含选自由以下组成的组中的一种或多种：...
【专利技术属性】
技术研发人员：K·罗伯茨，A·赞格赫里尼，D·格拉布斯，N·克里斯蒂安森，J·哈夫拉内克，
申请(专利权)人：阿泽达公司，
类型：发明
国别省市：
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