十足目虹彩病毒1和虾肝肠胞虫双重SYBR Green I荧光定量PCR检测方法技术

十足目虹彩病毒1和虾肝肠胞虫双重SYBR Green I荧光定量PCR检测方法，属于水生生物病原检测技术领域。本发明专利技术方法包括：在已经建立的单一DIV1检测方法的基础上，根据EHP的孢壁蛋白设计特异性引物；EHP‑SWP标准质粒构建；DIV1和EHP双重SYBRGreenI荧光定量PCR检测方法的建立。本发明专利技术的方法能够达到在同一管内同时检测养殖虾DIV1和EHP两种病原的目的，具有较高的特异性，对其他常见虾类病原和健康虾无交叉反应。本方法具有较高的灵敏度和稳定性，且操作简便，对于单一样品的检测小于2h，可准确、快速诊断DIV1和EHP的感染，为两种病原的监测和早期防控奠定基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于水生生物病原检测，具体涉及十足目虹彩病毒1和虾肝肠胞虫双重sybr green i荧光定量pcr检测方法。

技术介绍

1、十足目虹彩病毒1(decapod iridescent virus 1，div1)隶属于虹彩病毒科十足目虹彩病毒属，包含两个病毒株，即红螯螯虾虹彩病毒(cheraxquadricarinatusiridovirus，cqiv)和虾血细胞虹彩病毒(shrimp hemocyteiridescent virus，shiv)。病毒粒子直径大小约为150nm，二十面体对称，基因组为单股双链dna，相对分子质量约为166kbp。

2、div1主要感染水生甲壳动物，具有广泛的宿主范围，其易感宿主包括红螯螯虾、南美白对虾、罗氏沼虾、日本沼虾、克氏原螯虾、脊尾白虾、中华绒螯蟹和粗腿厚纹蟹等。此外，div1具有多样的传播途径，可通过混养，摄食等水平传播。

3、在虾类研究中发现，div1感染可引起养殖虾类短时间内爆发大面积死亡，累计死亡率可达到80％～100％。病虾出现空肠、空胃、肝胰腺颜色变浅萎缩、软壳和部分个体体色本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种十足目虹彩病毒1和虾肝肠胞虫双重荧光定量PCR引物组，其特征在于，包括：以EHP孢壁蛋白为靶基因的扩增引物EHP-QF和EHP-QR；以及以DIV1主要衣壳蛋白为靶基因的扩增引物DIV-QF和DIV-QR；所述EHP-QF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述EHP-QR的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述DIV-QF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述DIV-QR的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.如权利要求1所述的一种十足目虹彩病毒1和虾肝肠胞虫双重荧光定量PCR引物组，其特征在于，所述EHP-QF和EHP-QR的扩增片段长...

【技术特征摘要】

1.一种十足目虹彩病毒1和虾肝肠胞虫双重荧光定量pcr引物组，其特征在于，包括：以ehp孢壁蛋白为靶基因的扩增引物ehp-qf和ehp-qr；以及以div1主要衣壳蛋白为靶基因的扩增引物div-qf和div-qr；所述ehp-qf的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述ehp-qr的核苷酸序列如seq id no.4所示，所述div-qf的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述div-qr的核苷酸序列如seq id no.6所示。

2.如权利要求1所述的一种十足目虹彩病毒1和虾肝肠胞虫双重荧光定量pcr引物组，其特征在于，所述ehp-qf和ehp-qr的扩增片段长度为102bp，其核苷酸序列如seq id no.8所示。

3.含有权利要求2所述的扩增片段序列的标准质粒，其特征在于，该质粒含ehp-swp基因片段318bp，连接载体为pmd19t，其核苷酸序列如seq id no.7所示。

4.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：许婷，谈荣想，斯广杰，
申请(专利权)人：绍兴文理学院，
类型：发明
国别省市：