一种DNA载体、定点插入外源基因序列的方法及其应用技术

本发明专利技术公开一种DNA载体、定点插入外源基因序列的方法及其应用，所述DNA载体包括基础架构DNA载体和目的基因DNA载体，基础架构DNA载体的遗传信息包括第一启动子基因序列、可替换基因序列、第二筛选标记基因序列、第二终止子基因序列；目的基因DNA载体包括目的基因DNA表达单元，目的基因DNA表达单元包括FRT3、目的基因序列、第一终止子基因序列、第二启动子基因序列、FRT；可替换基因序列可以替换为所述目的基因DNA表达单元。本发明专利技术提供的DNA载体可用于实现外源基因的稳定高效表达，遗传背景清晰，稳转细胞株构建时间大幅缩短，促进细胞表达抗体或蛋白的大规模生产应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别涉及一种dna载体、定点插入外源基因序列的方法及其应用。

技术介绍

1、稳转细胞株是指通过分子生物学方法，将特定基因整合至细胞基因组中，使细胞能长期稳定表达目的基因或干扰基因表达的细胞系，适用于各种研究应用，如重组蛋白和抗体生产、基因编辑、功能研究、药物筛选等。通过建立稳转细胞系，可大幅降低频繁转染或者病毒包装的成本，方便在目的细胞中研究基因功能；区别于瞬转随机短期引入高拷贝数的表达，稳转细胞株可通过筛选和扩增获得稳定高表达或拷贝数适量的细胞系。

2、稳转细胞株构建的方法大致分为4类，最主流的方法是慢病毒介导，具有介导效率高，构建耗时短的优点，但存在一定的生物安全风险，且较大基因包装慢病毒难度高，细胞系在慢病毒感染时可能发生凋亡或变态，且多基因高通量稳转的工作量较大。第二类是转座子系统介导的细胞稳转系统，实验方法安全简单，有利于转座到宿主基因组的转录活性区域，可有效介导较大基因，可将单个或多个基因持续表达，该方法有效弥补了慢病毒介导的不足。第三类是crispr敲入系统，该方法可实现外源基因的定点插入，但crispr系统的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种DNA载体，用于定点插入外源基因序列，其特征在于，所述DNA载体包括：

2.如权利要求1所述的DNA载体，其特征在于，

3.如权利要求2所述的DNA载体，其特征在于，

4.如权利要求1所述的DNA载体，其特征在于，

5.如权利要求1所述的DNA载体，其特征在于，

6.一种定点插入外源基因序列的方法，采用如权利要求1至5任意一项所述的DNA载体，其特征在于，包括以下步骤：

7.如权利要求6所述的定点插入外源基因序列的方法，其特征在于，所述“通过第一抗性筛选和单克隆筛选得到中间重组细胞株”的步骤包括：

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【技术特征摘要】

1.一种dna载体，用于定点插入外源基因序列，其特征在于，所述dna载体包括：

2.如权利要求1所述的dna载体，其特征在于，

3.如权利要求2所述的dna载体，其特征在于，

4.如权利要求1所述的dna载体，其特征在于，

5.如权利要求1所述的dna载体，其特征在于，

6.一种定点插入外源基因序列的方法，采用如权利要求1至5任意一项所述的dna载体，其特征在于，包括以下步骤：

7.如权利要求6所述的定点插入外源基因序列的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯奇，易维京，王建琴，姬成东，刘燕，尹欢，
申请(专利权)人：重庆艾生斯生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：

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