一种重组四型胶原蛋白的高效表达与纯化方法及其在化妆品中的应用技术

本发明专利技术涉及化妆品技术领域，具体公开了一种重组四型胶原蛋白的高效表达与纯化方法及其在化妆品中的应用，高效表达与纯化方法，包括以下步骤：表达体系构建，载体选择与处理、目的基因插入、宿主细胞转化与筛选、诱导表达调控、蛋白纯化、初步处理、亲和层析和精细纯化等步骤，本发明专利技术通过对表达体系的精细优化，选用带有强启动子的pET‑30b(+)质粒，将构建好的重组质粒转入宿主细胞大肠杆菌，并针对性地对重组基因进行密码子优化等操作，使得重组四型胶原蛋白基因转录、翻译更为高效，相较于传统未经优化的表达系统，单位体积培养液中的蛋白表达量能够提升45％以上，为规模化生产提供了充足的原料基础，有效满足市场对于重组四型胶原蛋白日益增长的需求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于化妆品，具体涉及一种重组四型胶原蛋白的高效表达与纯化方法及其在化妆品中的应用。

技术介绍

1、胶原蛋白作为细胞外基质的关键成分，广泛参与众多生理过程，诸如组织架构支撑、细胞黏附、迁移以及信号传导等。其中，四型胶原蛋白在基底膜形成过程中扮演着不可或缺的角色，对维持组织器官的正常形态与功能意义重大，于肾脏、血管、皮肤等组织的稳态维持方面，有着极为关键的应用价值，在生物医药、组织工程、化妆品等领域的需求也日益攀升。

2、传统获取四型胶原蛋白的方式主要依赖天然组织提取。然而，这一方法存在诸多难以克服的弊端。一方面，天然组织来源受限，动物组织中胶原蛋白含量本就不高，大规模采集不仅成本高昂，还面临着伦理争议；

3、另一方面，从天然组织提取的胶原蛋白纯度较低，杂质成分繁杂，包含其他类型胶原蛋白、糖蛋白以及各类细胞碎片等，后续繁杂的提纯工序不但会造成大量蛋白损失，而且难以彻底去除潜在的免疫原性物质，极大限制了其在临床上的直接应用。

4、随着基因工程技术的蓬勃发展，重组蛋白表达系统应运而生，为四型胶原蛋白的获取开辟了全新路径本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组四型胶原蛋白的高效表达与纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种重组四型胶原蛋白的高效表达与纯化方法，其特征在于：所述目的基因插入具体为将长度为1041bp的重组四型胶原蛋白基因片段，将其与上述经双酶切处理的pET-30b(+)质粒，按照摩尔比3:1的比例加入到连接反应体系中，再加入DNA连接酶及连接缓冲液，16℃过夜连接，构建重组质粒。

3.根据权利要求1所述的一种重组四型胶原蛋白的高效表达与纯化方法，其特征在于：所述S2中宿主细胞转化步骤为将构建好的重组质粒加入到感受态大肠杆菌(如冰浴预冷的BL21(DE3)感受态细胞10...

【技术特征摘要】

1.一种重组四型胶原蛋白的高效表达与纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种重组四型胶原蛋白的高效表达与纯化方法，其特征在于：所述目的基因插入具体为将长度为1041bp的重组四型胶原蛋白基因片段，将其与上述经双酶切处理的pet-30b(+)质粒，按照摩尔比3:1的比例加入到连接反应体系中，再加入dna连接酶及连接缓冲液，16℃过夜连接，构建重组质粒。

3.根据权利要求1所述的一种重组四型胶原蛋白的高效表达与纯化方法，其特征在于：所述s2中宿主细胞转化步骤为将构建好的重组质...

【专利技术属性】
技术研发人员：高禄栋，康跻耀，高向濡，
申请(专利权)人：陕西东方科美生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：