【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别是涉及slc35e2b在hacat细胞模型构建中的应用。
技术介绍
1、银屑病是一种表现为红斑、斑块、鳞屑的慢性炎症性皮肤病，在关于银屑病的遗传学研究过程中，不少研究提示银屑病与其他疾病(如糖尿病、克罗恩病、类风湿性关节炎等)存在共同的遗传学基础。研究发现银屑病的一些易感基因，如cdkal1、psors2、psors3、psors4、il12b、il23a及il23r等，这些基因均被发现同时也与2型糖尿病存在关联。
2、溶质转运载体35(solute carrier 35，slc35)是slc家族中的第35个成员，分为7个亚型(a-g)，是一种由300～400个氨基酸组成的疏水性蛋白质。slc35多数成员定位在高尔基复合体膜上，另有一小部分定位在细胞膜上，主要转运细胞内的相应单糖核苷酸并保证糖基化过程的顺利进行，slc35被认为是糖基化途径中的关键调节因子。
3、目前有关slc35e2b的研究甚少，其功能尚不清楚。根据前期研究结果，为进一步探讨slc35e2b对斑块型银屑病的影响和可能的机制，本课题组分别通过沉默或过表达slc35e2b基因建立体外培养的hacat细胞模型，探索slc35e2b基因对角质形成细胞增殖、凋亡、分化和炎症因子分泌的影响。该研究对探究slc35e2b在角质形成细胞的作用、相关机制及可能参与的分子通路有重要意义，同时为指导银屑病的治疗提供新的理论依据，具备一定经济效益和社会效益。
技术实现思路
1、本专利技术的
2、为解决上述技术问题，实现上述目的，本专利技术通过如下技术方案予以实现：
3、本课题组前期对753例银屑病患者进行了相关统计，发现其中糖尿病的发生率明显升高。为了探究银屑病与糖尿病之间更多的共享易感基因，通过全外显子基因测序法对47例银屑病患者及14例健康对照全血进行差异基因检测，结果从多个相关的基因中发现了slc35e2b基因位点突变。我们进一步通过免疫组化发现slc35e2b表达定位于表皮层角质形成细胞，并且在斑块型银屑病患者中低表达。
4、沉默或过表达slc35e2b基因的hacat细胞模型构建方法，其分别基于sirna诱导基因沉默和慢病毒介导基因过表达技术实现。
5、沉默slc35e2b基因的hacat细胞模型构建方法，包括如下步骤：
6、1.设计sirna引物序列：根据slc35e2b基因的信息及实验要求，根据引物设计的原则，利用primer&oligo软件选取引物序列，然后合成引物。
7、2.选择最优sirna引物序列：通过预实验结果并结合扩增溶解曲线选择最优的引物进行正式实验。
8、3.设计引物序列：在genbank平台查询slc35e2b基因引物序列，通过pubmed的primer blast验证后，选取合适序列，合成所需引物。
9、4.转染：通过转染hacat细胞获得slc35e2b基因沉默的hacat细胞。
10、过表达slc35e2b基因的hacat细胞模型构建方法，包括如下步骤：
11、1.构建慢病毒表达载体：确定物种及选择目的基因序列的慢病毒表达载体，根据slc35e2b基因的信息及实验要求，在genbank平台查询slc35e2b基因序列，基因名称(ensembl)：ensmusg00000019731，敲除基因genbank编码：nm_177766.3；验证并合成目的基因，然后构建慢病毒表达载体。
12、2.预实验：摸索最佳感染复数(multiplicity of infection,moi)，确定每个细胞加入的病毒数。
13、3.感染hacat细胞：通过腺病毒介导hacat细胞slc35e2b基因过表达。
14、与现有技术相比，本专利技术具有的有益效果为：
15、本专利技术主要基于sirna诱导基因沉默技术和慢病毒介导基因过表达技术建立沉默或过表达slc35e2b基因的hacat细胞体外培养模型，模型构建成功后经rt-pcr方法检测比较slc35e2b基因的表达水平，在此基础上可进一步探索slc35e2b基因对角质形成细胞增殖、凋亡、分化和炎症因子分泌的影响。同时，为研究slc35e2b基因通过影响角质形成细胞从而在银屑病发病机制及可能参与的分子通路提供主要的细胞实验材料。
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1.SLC35E2B在银屑病研究的Hacat细胞模型构建中的应用。
2.沉默SLC35E2B的Hacat细胞模型构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，SiRNA引物序列如下：
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，转录引物序列：
5.SLC35E2B过表达的Hacat细胞模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.用于沉默SLC35E2B基因的SiRNA，其特征在于，SiRNA引物序列如下：
【技术特征摘要】
1.slc35e2b在银屑病研究的hacat细胞模型构建中的应用。
2.沉默slc35e2b的hacat细胞模型构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，sirna引物序列如下：
【专利技术属性】
技术研发人员：王晓华，苏艳文，蔄茂强，林秀球，
申请(专利权)人：南方医科大学皮肤病医院广东省皮肤病医院，广东省皮肤性病防治中心，中国麻风防治研究中心，
类型：发明
国别省市：
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