本发明专利技术涉及一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CGMCC No.32593及其菌剂制备和应用，属于微生物的技术领域。本发明专利技术的菌株同时具有解磷、解钾、固氮和产吲哚乙酸(IAA)的作用。将贝莱斯芽孢杆菌CGMCC No.32593接种到LB液体培养基中，利用5L发酵罐进行发酵，得到液体微生物菌剂。本发明专利技术提供的菌剂制备方法简单，便于工业化生产。施用该液体微生物菌剂能够有效提高番茄的株高和地上部分鲜重，并提高农作物生产中土壤磷的利用率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，更具体地说，它涉及一株贝莱斯芽孢杆菌(bacillusvelezensis)cgmcc no.32593和微生物菌剂的制备及其应用。
技术介绍
1、磷元素是植物生长发育必需的元素之一，在植物抵御胁迫、适应逆境中发挥重要作用。我国耕地中有2/3左右严重缺磷。土壤中的大部分磷被螯合在难降解的矿物和有机化合物中，只有少量磷以无机正磷酸盐的形式直接被微生物和植物利用。各种难溶性的无效态磷，无法被植物直接吸收利用，大大降低了土壤中磷的利用率，限制了作物生长。
2、微生物在分解土壤中不溶性磷方面发挥着至关重要的作用。已报道有多株植物根际促生菌具有良好的作物促生长和改善土壤的功效。贝莱斯芽胞杆菌是芽胞杆菌属中一种新兴的功能性菌种，在yating zhang等的研究中分离得到一株贝莱斯芽孢杆菌d103，其基因序列url为www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/cp095093。研究表明菌株d103具有固氮、解磷、解钾、产生生长素吲哚乙酸(iaa)等功能，其溶解无机磷的能力为68.67mg/l，在水培实验中，用d103悬浮液处理的玉米植株表现出促生长效果(zhang y，microbiol spectr，2024，12:e0114724)。
3、专利cn119020202a公开了一种具有解磷功能的微生物菌剂及其制备方法和应用，其所述微生物菌剂活性成分为贝莱斯芽孢杆菌cy30。该菌株溶解植酸钙的能力为23.80±1.08mg/l，其通过发酵制备的微生物菌剂活菌数为60～100亿/g。</p>4、现有解磷菌株解磷能力较弱，功能单一，发酵生产水平偏低，限制了在微生物菌剂制备中的应用，急需筛选新的优质解磷菌，开发具有多种功能的微生物菌剂。本专利技术涉及的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)cgmcc no.32593及其微生物菌剂，兼具多种功能，仅使用单一菌剂就可达到解磷、解钾、固氮、产生iaa的作用，且菌剂制备方法简单，生产效率高，培养条件要求低，周期短，适合工业化大批量生产的需要，便于推广使用。施用菌剂能促进作物增产、降低土壤磷肥依赖，对于确保土壤中磷资源的可持续利用具有重大意义。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一株贝莱斯芽孢杆菌(bacillusvelezensis)cgmcc no.32593及其应用。
2、本专利技术提供了一株贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)cgmcc no.32593及其应用，采用如下技术方案：
3、一株贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmcc no.32593。
4、本专利技术提供了一种贝莱斯芽孢杆菌cgmcc no.32593的分离培养方法，采用如下的技术方案：
5、一种贝莱斯芽孢杆菌cgmcc no.32593的分离筛选方法，包括如下步骤：
6、土壤采集于天津市，称取10g采集的土壤样品，进行梯度稀释，将得到土壤上清悬液涂布于pikovskaya无机磷和pikovskaya有机磷固体培养基上筛选，在35～39℃条件下培养48～72h，选择培养基上生长良好且有透明圈的单菌落，在同样的固体培养基上，相同培养条件下继续培养，以此纯化获得期望菌株。
7、一种贝莱斯芽孢杆菌cgmcc no.32593培养方法，包括如下步骤：
8、(1)在lb固体培养基上划线接种，35～39℃下培养12～14h，得到单菌落。
9、(2)将单菌落接种在5ml lb液体培养基中，在35～39℃，170～190r/min条件下培养12～14h,得到一级种子液。
10、优选的，所述lb培养基的ph为7.0，培养温度为37℃，培养时间为14h。
11、本专利技术所述贝莱斯芽孢杆菌cgmcc no.32593具有多种功能，包括：解磷、解钾、固氮和产生iaa。
12、本专利技术还提供一种微生物菌剂及其制备方法，所述微生物菌剂包含上述贝莱斯芽孢杆菌cgmcc no.32593，制备方法如下：
13、(1)在lb固体培养基上划线接种贝莱斯芽孢杆菌cgmcc no.32593，37℃下培养14h，得到单菌落。
14、(2)将单菌落接种在5ml lb液体培养基中，在37℃，170～190r/min条件下培养14h，得到一级种子液。
15、(3)将一级种子液，按1～5％的接种量接种到50ml的lb液体培养基中，在37℃，170～190r/min条件下培养14h，得到二级种子液。
16、(4)将二级种子液按1～5％的接种量接种于发酵培养基中，利用5l发酵罐进行发酵。培养温度35～39℃，调节溶氧(do)与搅拌转速串联，使溶氧维持在20～30％，发酵培养24～36h。
17、优选的，一、二级种子液培养转速为190r/min，所述一级种子液按1％(v/v)的接种量接种于二级种子液，二级种子液按1％(v/v)的接种量接种于发酵培养基。
18、优选的，发酵培养基配方(1l)：胰蛋白胨10.0g，酵母浸粉5.0g，氯化钠10.0g，葡萄糖20.0g，蒸馏水1000ml，ph7.0。发酵罐溶氧维持在30％，培养时间为36h。
19、优选的，所述微生物菌剂为液体菌剂，所述微生物菌剂中贝莱斯芽孢杆菌cgmccno.32593的活菌数为1～2×1011cfu/ml。
20、本专利技术还提供所述微生物菌剂在促进植物生长中的应用。试验证明，所述微生物菌剂能够有效提高番茄的株高和地上部分鲜重。
21、本专利技术所提供微生物菌剂具有溶磷活性，能够将土壤中的难溶性磷转化为植物能够直接吸收利用的可溶性磷，能够提高农作物生产中土壤磷的利用率。
22、有益效果：
23、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
24、1、本专利技术提供的贝莱斯芽孢杆菌cgmcc no.32593，兼具多种功能，单一菌株就可达到解磷、解钾、固氮、产生iaa的作用。
25、2、本专利技术提供的微生物菌剂制备方法简单，生产效率高，培养条件要求低，周期短，适合工业化大批量生产的需要，便于推广使用。
26、3、施用本专利技术提供的微生物菌剂，能够有效提高番茄的株高和地上部分鲜重，促进植物生长，同时提高植株对土壤中磷的利用率。
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【技术保护点】
1.一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，其特征在于，2024年11月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.32593，菌株的16S rRNA基因序列如SEQID No.1所示。
2.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌CGMCC NO.32593，其特征在于，具备解磷、解钾、固氮和产生生长素吲哚乙酸(IAA)的能力。
3.一种微生物菌剂，其特征在于，活性成分为如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌CGMCC NO.32593。
4.如权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，微生物菌剂的制备方法为：在LB固体平板上划线接种贝莱斯芽孢杆菌CGMCC NO.32593，37℃条件下培养14h，得到单菌落，将单菌落接种在5mL LB液体培养基中，在37℃，190r/min条件下培养14h，得到一级种子液，将一级种子液，按1％的接种量接种到50mL LB液体培养基中，在37℃，190r/min条件下培养14h，得到二级种子液，将二级种子液按1％(V/V)的接种量接种于发酵培养基中，利用5L发酵罐进行发酵。培养温度37℃，调节溶氧(DO)与搅拌转速串联，使其维持在30％，发酵培养36h。
5.根据权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，所述的微生物菌剂中含贝莱斯芽孢杆菌CGMCC NO.32593的活菌数为1～2×1011CFU/mL。
6.一种权利要求1或2所述贝莱斯芽孢杆菌CGMCC NO.325933或权利要求3～5任一项所述的微生物菌剂在促进植物生长中的应用。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述植物为番茄。
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【技术特征摘要】
1.一株贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)，其特征在于，2024年11月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmcc no.32593，菌株的16s rrna基因序列如seqid no.1所示。
2.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌cgmcc no.32593，其特征在于，具备解磷、解钾、固氮和产生生长素吲哚乙酸(iaa)的能力。
3.一种微生物菌剂，其特征在于，活性成分为如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌cgmcc no.32593。
4.如权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，微生物菌剂的制备方法为：在lb固体平板上划线接种贝莱斯芽孢杆菌cgmcc no.32593，37℃条件下培养14h，得到单菌落，将...
【专利技术属性】
技术研发人员：谭之磊，周镔，袁晓慧，苏萍月，谢晓轩，钟成，崔建东，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：
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