一种基于双色单分子定位的分子级分辨率显微术方法技术

本发明专利技术公开了一种基于双色单分子定位的分子级分辨率显微术MITI(Molecular‑level Imaging based on Two‑color Imaging)。本发明专利技术通过使用双色成像的方法，将原本不能区分的荧光分子的定位点成功的通过双色的方法，将不同的定位点集合分配到对应的荧光通道中成功区分，进而通过再次拟合荧光分子定位点的分布，得到荧光分子定位点分布的中心位置和再次提高的定位精度，从而提高分辨率。本发明专利技术能够最高实现2nm的空间分辨率，为分子尺度的生物学结构和相互作用过程的解析提供了重要手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于超分辨显微，具体涉及一种基于双色单分子定位的分子级分辨率显微术方法。

技术介绍

1、在过去的近二十年中，超分辨显微技术已经成为了揭示复杂生物学结构和过程的关键手段，并且得到了广泛的发展和应用。然而，传统的单分子定位技术的分辨能力虽然能够打破光学衍射极限，但依然受限于解析10nm以下的尺度范围。smlm(single-moleculelocalization microscopy)的分辨能力难以解析分子级尺度，即几个纳米尺度的复杂生物学过程的研究，例如生物大分子之间的相互作用，蛋白质之间的相互作用。近几年来，为了满足解析10nm的生物学过程，已经有几个研究提出了不同的方法将光学显微镜的分辨能力提高到了几个纳米，进入了显纳镜的时代。

2、在基于dna-piant(dna point accumulation in nanoscale topography)序列成像的方法非常有效的区分了两个荧光分子的分布，获得了埃级的定位精度。然而dna-paint要求用编码修饰的单链dna并访问感兴趣的目标点，这种标记方法比使用荧光分子直接标记在感兴本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于双色单分子定位的分子级分辨率显微术方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于双色单分子定位的分子级分辨率显微术方法，其特征在于，还包括通道对齐与定位精度优化：在进行MITI成像前，使用已知尺寸的荧光小球在两个通道分别成像，建立矫正矩阵以实现两个荧光分子通道间的精确对齐，并通过拟合高斯分布的衍射受限图像点扩散函数优化单分子点的定位精度。

3.根据权利要求1所述的基于双色单分子定位的分子级分辨率显微术方法，其特征在于，步骤S1.中所述两种不同的荧光分子选自荧光染料Cy3、Cy5、Alexa 647，或光控荧光蛋白PcStar、PAmCh...

【技术特征摘要】

1.一种基于双色单分子定位的分子级分辨率显微术方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于双色单分子定位的分子级分辨率显微术方法，其特征在于，还包括通道对齐与定位精度优化：在进行miti成像前，使用已知尺寸的荧光小球在两个通道分别成像，建立矫正矩阵以实现两个荧光分子通道间的精确对齐，并通过拟合高斯分布的衍射受限图像点扩散函数优化单分子点的定位精度。

3.根据权利要求1所述的基于双色单分子定位的分子级分辨率显微术方法，其特征在于，步骤s1.中所述两种不同的荧光分子选自荧光染料cy3、cy5、alexa 647，或光控荧光蛋白pcstar、pamcherry1，ffdronpa。

4.根据权利要求1所述的基于双色单分子定位的分子级分辨率显微术方法，其特征在于，步骤s2中所述超分辨光学显微镜配备的四个波长激光器分别为...

【专利技术属性】
技术研发人员：付国，聂雨涵，
申请(专利权)人：中国科学院上海光学精密机械研究所，
类型：发明
国别省市：