一种鹌鹑CENP-A多克隆抗体制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种鹌鹑CENP‑A多克隆抗体制备方法和应用，所述鹌鹑CENP‑A多克隆抗体制备方法，包括构建含有如SEQ ID NO.1所示CENP‑A目的基因片段的重组表达载体；将重组表达载体转化至感受态细胞并诱导表达融合蛋白，收集并纯化后得到CENP‑A重组蛋白；将CENP‑A重组蛋白作为抗原进行动物免疫处理，收集分离动物血清中抗体作为CENP‑A多克隆抗体。本发明专利技术还开发了用于CUT&Tag测序的鹌鹑CENP‑A抗体，填补了鹌鹑商品化CENP‑A抗体的空白，也是进一步构建鹌鹑基因组完整图谱的重要基础工作，为后续揭示鸟类等脊椎动物的着丝粒相关基因如何在不同物种间演化过程提供基础支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于免疫生物，尤其涉及一种鹌鹑cenp-a多克隆抗体制备方法和应用。

技术介绍

1、众所周知，有丝分裂是真核细胞增殖的主要方式，细胞通过有丝分裂将复制的遗传物质均等地分配至子代细胞。该过程主要通过着丝粒(centromere)组建动粒(kinetochore)完成。着丝粒是染色体的主缢痕，即将染色体的较细部位，动粒则被定义为能够使着丝粒dna附着纺锤丝的蛋白质结构。动粒通过介导染色体和纺锤丝之间的相互作用，使分裂期染色体迁移。在电镜观察下动粒呈3层圆盘状结构。即内层、中间层和外层。外层动粒用于和微管发生作用，中间层动粒主要作为联系内外两层结构的桥梁。内层动粒是染色质的特化层，由着丝粒染色质和基本蛋白质组成，在细胞周期中一直与着丝粒dna相连。

2、cenp-a是在动物体内特异表达的着丝粒特异性蛋白质，相对分子质量为17kda。与其他组蛋白相比，cenp-a的保守性较低。研究表明，即使在相似物种的cenp-a组蛋白c端折叠中也存在差异，因此比较各物种cenp-a之间的差异一直被认为是解析着丝粒表观遗传调控机制的基础。鉴于cenp-a相对本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种鹌鹑CENP-A多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述鹌鹑CENP-A多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述SEQ ID NO.1所示的CENP-A目的基因片段重组于pet22b载体的双酶切位点之间。

3.根据权利要求1所述鹌鹑CENP-A多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述诱导表达融合蛋白的方法为：将构建的重组表达菌株挑取至LB液体培养基中培养，至菌液浓度OD 600为0.6-0.8后加入IPTG培养，诱导融合蛋白表达16-18h。

4.根据权利要求1所述鹌鹑CENP-A多克隆抗体的制备...

【技术特征摘要】

1.一种鹌鹑cenp-a多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述鹌鹑cenp-a多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述seq id no.1所示的cenp-a目的基因片段重组于pet22b载体的双酶切位点之间。

3.根据权利要求1所述鹌鹑cenp-a多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述诱导表达融合蛋白的方法为：将构建的重组表达菌株挑取至lb液体培养基中培养，至菌液浓度od 600为0.6-0.8后加入iptg培养，诱导融合蛋白表达16-18h。

4.根据权利要求1所述鹌鹑cenp-a多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述动物免疫处理方法为：取纯化好的cenp-a重组蛋白与弗氏佐剂进行乳化，注射入试验动物体内，经过6次免疫，最后一次终免70天后采集试验动物血清，收集血清即得抗血清。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：白皓，庄重，郭其新，陈世豪，常国斌，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：