骨骼肌肌纤维条件性诱导敲除hnRNPK基因小鼠模型的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种骨骼肌肌纤维条件性诱导敲除hnRNPK基因小鼠模型的构建方法及应用，属于动物模型技术领域，其中，构建方法包括以下步骤：(1)将hnRNPK<supgt;flox/flox</supgt;小鼠与ACTA1‑CreEsr1阳性小鼠杂交，并筛选出hnRNPK<supgt;flox/+</supgt;‑ACTA1‑CreEsr1阳性子代小鼠；(2)将hnRNPK<supgt;flox/+</supgt;‑ACTA1‑CreEsr1阳性子代小鼠与hnRNPK<supgt;flox/flox</supgt;小鼠杂交，并筛选出hnRNPK<supgt;flox/flox</supgt;‑ACTA1‑CreEsr1阳性小鼠；(3)对hnRNPK<supgt;flox/flox</supgt;‑ACTA1‑CreEsr1阳性小鼠进行Tamoxifen处理，使Cre重组酶激活，切除hnRNPK基因的第3至第7内含子片段，实现hnRNPK基因的选择性敲除，即构建出骨骼肌肌纤维条件性诱导敲除hnRNPK基因小鼠模型。本发明专利技术填补了现有技术在骨骼肌肌纤维诱导敲除hnRNPK基因小鼠制备的空缺，为在个体水平揭示RNA结合蛋白hnRNPK在骨骼肌生长发育调控中的功能研究提供了可信的动物模型。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及动物模型，特别涉及一种骨骼肌肌纤维条件性诱导敲除hnrnpk基因小鼠模型的构建方法及应用。

技术介绍

1、异质核核糖核蛋白(hnrnps)是一类广泛表达的rna结合蛋白(rbp)，该家族包括从hnrnpa1到hnrnpu等20名成员，目前已在细胞核、细胞质、质膜和线粒体中被检测到，与位于基因启动子区域元件相互作用。hnrnpk是hnrnp家族中研究最多的成员之一，其相对分子量约为66kda，并主要含有四种功能域，其中3个k同源结构域(kh1、kh2和kh3)负责与单链“uc3-4”rna和单链或双链的“cttcc”dna结合；ki结构域负责与特定蛋白质结合；另外，n端和c端分别有一个nls核定位信号序列和kns核胞浆穿梭信号序列。

2、hnrnpk蛋白的结构特点决定了其在细胞中功能与作用机制的复杂性。研究发现，hnrnpk作为一种重要的调节因子，通过影响蛋白质的表达调节参与肌肉发育、精子发生、血管生成、红细胞成熟、器官发生和癌症发生等重要生物学过程。然而，hnrnpk-/-纯合子小鼠早于13.5dpc死亡，而hnrnpk+/-杂合本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.骨骼肌肌纤维条件性诱导敲除hnRNPK基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的骨骼肌肌纤维条件性诱导敲除hnRNPK基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述诱导剂为他莫昔芬。

3.根据权利要求1或2所述的骨骼肌肌纤维条件性诱导敲除hnRNPK基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中，采用基因型鉴定方法筛选出hnRNPKflox/+-ACTA1-CreEsr1阳性子代小鼠，鉴定所用条件性引物为：

4.根据权利要求3所述的骨骼肌肌纤维条件性诱导敲除hnRNPK基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(...

【技术特征摘要】

1.骨骼肌肌纤维条件性诱导敲除hnrnpk基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的骨骼肌肌纤维条件性诱导敲除hnrnpk基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述诱导剂为他莫昔芬。

3.根据权利要求1或2所述的骨骼肌肌纤维条件性诱导敲除hnrnpk基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中，采用基因型鉴定方法筛选出hnrnpkflox/+-acta1-creesr1阳性子代小鼠，鉴定所用条件性引物为：

4.根据权利要求3所述的骨骼肌肌...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐永杰，任柯瑾，陈诺，王雨溪，张朋朋，徐海霞，程晓芳，李岑岑，
申请(专利权)人：信阳师范大学，
类型：发明
国别省市：