本发明专利技术公开一种前白蛋白免疫层析检测试剂条，包括反应底板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；层析膜设置在反应底板的中部，样品垫和吸水纸分别设置在反应底板的两端，反应底板中部为层析膜，层析膜和样品垫中间为结合垫，样品垫部分叠加搭接在结合垫上，结合垫和吸水纸分别部分叠加搭接在层析膜的一侧和另一侧；结合垫上固相了用于前白蛋白抗体标记的时间分辨微球和用于DNP‑BSA标记的量子点微球；层析膜上具有包被有前白蛋白检测抗体的检测线和包被有兔抗DNP质控抗体的质控线；层析膜上沿层析方向依次平行间隔设置检测线和质控线。还公开对应制备方法、检测试剂盒、检测方法及应用，利用时间分辨微球免疫层析的灵敏性实现高灵敏度、快捷方便准确定量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫分析，特别涉及一种前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法及应用。
技术介绍
1、前白蛋白(prea l buminn,pa)是由肝细胞合成的一种血清蛋白，有4个相同亚基组成的四聚体，相对分子量61000，生物半衰期短(1.9天)。目前，临床主要用于评估肝功能损伤和营养不良，同时也是药物中毒引起肝损伤的敏感指标。前白蛋白是一种非特异性宿主防御物质，可以清除感染期间释放于循环中的部分有毒代谢物。目前已经证实，炎症和细菌感染时血清前白蛋白水平降低，故可以作为评估感染性疾病病情变化和治疗效果的指标。此外，前白蛋白还可以通过促进淋巴细胞成熟而增强免疫力，在肿瘤早期预测方面具有重要价值。
2、目前已知的测定前白蛋白的方法有：酶联免疫测定法(elisa)、放射免疫测定法、免疫比浊法等。这些方法都存在操作繁琐，需要特殊的设备，样本需要预处理等缺点。比如免疫比浊法是近年来应用比较多的一种检测方法，如专利文献cn101000349a、cn107490697a，但是需要全自动生化仪，仪器成本很高，并且只能测试血清或者血浆样本，需要对样本前处理，并且对人员的专业化要求较高。利用时间分辨微球免疫层析技术定量检测前白蛋白，有检测仪器精巧轻便，操作简单迅速以及结果准确的优点，并且可以测试全血样本、血清样本和血浆样本，然而目前市场上尚未出现该技术的检测试剂盒。
3、因此，开发操作简单、仪器成本低、适合现场即时检测的前白蛋白产品，是本领域技术人员需要解决的技术问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术的缺陷，针对相关技术中的技术缺陷，提供一种前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法及应用，前白蛋白免疫层析检测试剂条是基于时间分辨微球定量检测前白蛋白的免疫层析试剂条；利用时间分辨微球免疫层析的灵敏性，结合荧光免疫分析仪实现灵敏度高、快捷方便并可以准确定量的前白蛋白检测试剂条及制备方法。
2、本专利技术的第一方面在于提供一种基于时间分辨微球的定量检测前白蛋白的前白蛋白免疫层析检测试剂条，所述前白蛋白免疫层析检测试剂条包括反应底板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述层析膜设置在所述反应底板的中部，所述样品垫和所述吸水纸分别设置在所述反应底板的两端，所述反应底板中部为所述层析膜，所述层析膜和所述样品垫中间为所述结合垫，所述样品垫部分叠加搭接在所述结合垫上，所述结合垫部分叠加搭接在所述层析膜的一侧，所述吸水纸部分叠加搭接在所述层析膜的另一侧；
3、所述结合垫上固相了用于前白蛋白抗体标记的时间分辨微球和用于dnp-bsa标记的量子点微球；
4、所述层析膜上具有包被有前白蛋白检测抗体的检测线和包被有兔抗dnp质控抗体的质控线；所述层析膜上沿层析方向依次平行间隔设置所述检测线和所述质控线。
5、优选的，所述前白蛋白抗体通过对人前白蛋白免疫小鼠获得；所述层析膜为硝酸纤维素膜；所述吸水纸由棉麻材质制成，使样本在所述吸水纸的毛细作用下从所述样品垫层析到所述层析膜并发生抗体抗原反应。
6、本专利技术的第二方面在于提供第一方面的一种前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法，包括：
7、s1，采用时间分辨微球标记前白蛋白抗体以形成时间分辨微球标记前白蛋白抗体溶液；所述时间分辨微球直径为200-400nm，激发光为340nm，发射光为610nm，斯托克斯位移大于150nm；
8、s2，采用量子点微球标记dnp-bsa以形成量子点微球标记dnp-bsa溶液；
9、s3，对所述时间分辨微球标记前白蛋白抗体溶液进行固相；
10、s4，进行所述前白蛋白检测抗体包被和所述兔抗dnp质控抗体包被；
11、s5，基于样品垫预处理溶液对所述样品垫进行预处理；所述样品垫预处理溶液包括：10-50mmo l/l pb，1％-5％蔗糖，0.1％-2％pvp，0.5-5％bsa，0.1％-2％s9和0.1-2％吐温20，并且所述样品垫预处理溶液的ph值为7.0-8.0；
12、s6，进行试剂条组装，包括：将所述样品垫、所述结合垫、所述层析垫和所述吸水纸依次搭接粘贴在所述反应底板上，并保持1-2mm的重合，使用切条机按照4mm宽度裁切形成所述前白蛋白免疫层析检测试剂条。
13、优选的，所述s1包括：
14、s11，利用edc和nhs活化所述时间分辨微球表面的羧基基团；
15、s12，加入前白蛋白抗体，室温偶联1-3小时；
16、s13，加入微球封闭剂封闭1-2小时，从而对没有偶联前白蛋白抗体的羧基基团进行封闭；
17、s14，将封闭后的溶液离心去上清，并加入微球保存液形成时间分辨微球标记前白蛋白抗体溶液。
18、优选的，所述s2包括：
19、s21，利用edc和nhs活化量子点微球表面的羧基基团；
20、s22，加入dnp-bsa，室温偶联1-3小时；
21、s23，加入微球封闭剂封闭1-2小时，从而对没有偶联dnp-bsa的羧基基团进行封闭；
22、s24，将封闭后的溶液离心去上清，并加入微球保存液形成量子点微球标记dnp-bsa溶液。
23、优选的，所述s1和所述s2中的所述离心的转速为10000-18000rpm，离心时间为10-20分钟；所述s1和所述s2在室温摇床上进行反应，所述摇床的转速控制在100-200rpm；所述s13和所述s23的所述加入微球封闭剂封闭1-2小时包括：加入所述微球封闭剂，在室温摇床转速100-200rpm的条件下反应1-2小时；其中，所述的微球封闭剂为合成的非蛋白和非血清基质高分子水溶性聚合物，含有氨基末端，能够通过与羧基化学键固定到微球的表面，从而达到封闭效果，所述封闭效果包括：封闭微球偶联蛋白和抗体后非特异位点，从而增强共轭物蛋白或抗体活性，并且能代替bsa实现高信噪比。
24、优选的，所述s3包括：
25、s31，将所述时间分辨微球标记前白蛋白抗体溶液用微球保存液稀释4倍形成第一稀释液；
26、s32，将所述第一稀释液与所述量子点微球标记dnp-bsa溶液按照100：(0.5-2)的比例混合形成第一混合液；
27、s33，按照2-6u l/cm将所述第一混合液喷涂在所述结合垫上并进行干燥和结合垫预处理，得到所述结合垫；所述干燥条件为30-45℃干燥12-24小时；
28、所述结合垫预处理采用配制的结合垫预处理溶液进行，所述结合垫预处理溶液包括：10-50mmo l/lpbs，1％-20％蔗糖，0.5％-10％海藻糖，0.5％-5％bsa，0.05％-0.2％pvp，0.05％-0.2％peg2000，0.5％-5％sds-l和0.1-5％吐温20，并且所述结合垫预处理溶液的ph值为7.4；所述结合垫预处理包括：将结合垫平铺放在所述结合垫预处理溶液中静置1-5min，然后在40-60℃的温度范围下鼓风干燥本文档来自技高网
...
【技术保护点】
1.一种前白蛋白免疫层析检测试剂条，其特征在于，所述前白蛋白免疫层析检测试剂条包括反应底板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述层析膜设置在所述反应底板的中部，所述样品垫和所述吸水纸分别设置在所述反应底板的两端，所述反应底板中部为所述层析膜，所述层析膜和所述样品垫中间为所述结合垫，所述样品垫部分叠加搭接在所述结合垫上，所述结合垫部分叠加搭接在所述层析膜的一侧，所述吸水纸部分叠加搭接在所述层析膜的另一侧；
2.根据权利要求1所述的一种前白蛋白免疫层析检测试剂条，其特征在于，所述前白蛋白抗体通过对人前白蛋白免疫小鼠获得；所述层析膜为硝酸纤维素膜；所述吸水纸由棉麻材质制成，使样本在所述吸水纸的毛细作用下从所述样品垫层析到所述层析膜并发生抗体抗原反应。
3.一种权利要求1-2任一所述的前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，包括：
4.根据权利要求3所述的前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述S1包括：
5.根据权利要求4所述的前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述S2包括：
6.根据权利要求5所述的前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述S1和所述S2中的所述离心的转速为10000-18000rpm，离心时间为10-20分钟；所述S1和所述S2在室温摇床上进行反应，所述摇床的转速控制在100-200rpm；所述S13和所述S23的所述加入微球封闭剂封闭1-2小时包括：加入所述微球封闭剂，在室温摇床转速100-200rpm的条件下反应1-2小时；其中，所述的微球封闭剂为合成的非蛋白和非血清基质高分子水溶性聚合物，含有氨基末端，能够通过与羧基化学键固定到微球的表面，从而达到封闭效果，所述封闭效果包括：封闭微球偶联蛋白和抗体后非特异位点，从而增强共轭物蛋白或抗体活性，并且能代替BSA实现高信噪比。
7.根据权利要求6所述的前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述S3包括：
8.根据权利要求7所述的前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述S4包括：
9.一种基于权利要求1-2任一所述的前白蛋白免疫层析检测试剂条的检测试剂盒，其特征在于，包括：
10.一种基于权利要求9所述的检测试剂盒定量检测前白蛋白的检测方法，其特征在于，包括：
...
【技术特征摘要】
1.一种前白蛋白免疫层析检测试剂条，其特征在于，所述前白蛋白免疫层析检测试剂条包括反应底板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述层析膜设置在所述反应底板的中部，所述样品垫和所述吸水纸分别设置在所述反应底板的两端，所述反应底板中部为所述层析膜，所述层析膜和所述样品垫中间为所述结合垫，所述样品垫部分叠加搭接在所述结合垫上，所述结合垫部分叠加搭接在所述层析膜的一侧，所述吸水纸部分叠加搭接在所述层析膜的另一侧；
2.根据权利要求1所述的一种前白蛋白免疫层析检测试剂条，其特征在于，所述前白蛋白抗体通过对人前白蛋白免疫小鼠获得；所述层析膜为硝酸纤维素膜；所述吸水纸由棉麻材质制成，使样本在所述吸水纸的毛细作用下从所述样品垫层析到所述层析膜并发生抗体抗原反应。
3.一种权利要求1-2任一所述的前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，包括：
4.根据权利要求3所述的前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述s1包括：
5.根据权利要求4所述的前白蛋白免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述s2包括：
6.根据权利要求5所述的前白蛋白免疫...
【专利技术属性】
技术研发人员：左威，朱永春，李寅龙，王璐瑶，王加义，李静，王洋，
申请(专利权)人：北京中生金域诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。