一种真菌漆酶过表达基因、质粒、菌株以及漆酶的表达方法技术

本发明专利技术公开了一种真菌漆酶过表达基因、质粒、菌株以及漆酶的表达方法，本申请提供了一种真菌漆酶过表达基因GME12003_g，所述真菌漆酶过表达基因GME12003_g的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示；另外本申请提供了一种真菌漆酶的过表达菌株，所述真菌漆酶的过表达菌株是在栓菌Trametes hirsuta AH28‑2中过表达真菌基因GME12003_g后得到的菌株；所述真菌漆酶过表达菌株命名为Trametes hirsuta AH28‑2(GME12003_g‑OE‑5)，改造后的菌株在无诱导的情况下漆酶酶活可达到1000U/L，是野生型菌株的3倍，该菌株具备高效表达漆酶的特点。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及微生物，尤其涉及一种真菌漆酶过表达基因、质粒、菌株以及漆酶的表达方法。

技术介绍

1、漆酶(苯二醇:氧氧化还原酶，ec1.10.3.2)是一类含铜的多酚氧化酶，在高效降解木质纤维素的过程中起到重要作用。木质纤维素是自然界存在的储量十分丰富的可再生资源，如果采用各种技术手段实现了木质纤维素的高效降解不仅能够减轻环境污染，还能缓解化石能源紧张，具有十分广阔的应用前景。微生物降解是利用微生物菌落(包括真菌、细菌等)实现对木质纤维素的降解，研究表明真菌降解木质纤维素的能力强于细菌。漆酶作为大部分真菌分泌的主要木质纤维素降解酶，它不仅在高效降解木质纤维素的过程中起到重要作用，还因为其泛的底物特异性、以o2为电子受体副产物为h2o等催化优势，应用于各行各业，例如：食品类加工、纺织类、生物燃料类、生物合成与修复类、生物传感器、化妆品行业等。但是野生型真菌漆酶的分泌量较低，胞外漆酶活性较弱，如何廉价安全制备漆酶成为广大学者极为关心的问题。为了解决这个问题，大家通常会选择真菌漆酶异源表达去提高漆酶产量。但现有技术中的异源表达的产量低、发酵周期长和成本高，难以达到工本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种真菌漆酶过表达基因GME12003_g，其特征在于，所述真菌漆酶过表达基因GME12003_g的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。

2.一种真菌漆酶过表达质粒，其特征在于，包含权利要求1所述的真菌漆酶过表达基因GME12003_g，所述真菌漆酶过表达质粒，包括线性化重组pYSK7质粒，以及连接的L22-GME12003_g-L24序列，所述L22-GME12003_g-L24序列为所述真菌漆酶过表达基因GME12003_g的两侧分别连接L22序列与L24序列形成。

3.一种如权利要求2所述的真菌漆酶过表达质粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:...

【技术特征摘要】

1.一种真菌漆酶过表达基因gme12003_g，其特征在于，所述真菌漆酶过表达基因gme12003_g的核苷酸序列如seq id no：1所示。

2.一种真菌漆酶过表达质粒，其特征在于，包含权利要求1所述的真菌漆酶过表达基因gme12003_g，所述真菌漆酶过表达质粒，包括线性化重组pysk7质粒，以及连接的l22-gme12003_g-l24序列，所述l22-gme12003_g-l24序列为所述真菌漆酶过表达基因gme12003_g的两侧分别连接l22序列与l24序列形成。

3.一种如权利要求2所述的真菌漆酶过表达质粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:

4.如权利要求2所述的一种真菌漆酶过表达质粒或权利要求3所述的真菌漆酶过表达质粒的制备方法，其特征在于，所述线性化重组pysk7质粒制备方法为：对重组pysk7质粒进行酶切，酶切产物经37℃孵育1.5h后，采用琼脂糖凝胶法纯化，得到线性化重组pysk7质粒；所述重组pysk7质粒，为采用启动子重组的pysk7质粒，所述重...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘娟娟，祝蓉，钱秋余，方泽民，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：