一种高纯度NK细胞的培养方法技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体涉及一种高纯度NK细胞的培养方法，该培养方法包括：采用密度梯度离心法从血液中分离出单个核细胞；使用培养瓶进行包被，将单核细胞使用淋巴细胞无血清培养基，添加GMP级重组蛋白或人源化抗体和血样本身血清进行培养20天；细胞培养至结束后，离心收集细胞，生理盐水洗涤NK细胞3次，然后将细胞用生理盐水重悬并加5%人血清白蛋白后定容至200 ml。本发明专利技术建立了符合GMP标准的高纯度细胞培养技术，不仅适用于外周血还同时适用于脐血NK的培养，仅需采集外周血及脐血样本50ml，且均在GMP条件下操作完成，8L体系20天左右所培养的细胞数量亦能达到临床治疗应用标准。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞培养，具体涉及一种高纯度nk细胞的培养方法。

技术介绍

1、越来越多的研究数据表明，自然杀伤细胞(natural killer cell，nk细胞)在控制病毒感染、癌症和自身免疫性疾病方面发挥着重要作用。近年来nk细胞以其独特优势逐渐成为肿瘤免疫治疗的新兴主力军，并在恶性肿瘤治疗中展现出不俗的实力。

2、nk细胞属于天然淋巴样细胞家族的大颗粒淋巴细胞，来源于骨髓淋巴样干细胞，分化、发育依赖于骨髓及胸腺微环境，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴结，占循环淋巴细胞总数的10％～15％。nk细胞是天然免疫的重要组成成分，是抵御病毒感染和细胞突变的第一道防线，无需预先致敏就能杀死威胁宿主的癌细胞、异体细胞和外来病原体感染的细胞，能够介导强大的抗肿瘤和抗病毒反应，既能直接杀伤肿瘤或感染细胞，又能间接增强抗体和t细胞介导的反应。目前被认为是癌症免疫监测、移植排斥和早期病毒免疫的关键效应细胞，已经在急性髓细胞白血病、慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征、神经母细胞瘤、以及胃癌、肝癌、肺癌、肠癌等实体瘤的治疗中表现出良好的治疗效果。...

【技术保护点】

1.一种高纯度NK细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述血液为脐血或外周血。

3.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述分离的具体步骤为：

4.如权利要求3所述的培养方法，其特征在于，在步骤（1.2）中，所述离心并收集上清血浆时离心参数为800g，15min；所述水浴锅灭活静置后离心为56℃的水浴锅灭活30 min，后4℃静置15min，后1200g，20min条件下离心。

5.如权利要求3所述的培养方法，其特征在于，在步骤（1.3）中，所述加入到高...

【技术特征摘要】

1.一种高纯度nk细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述血液为脐血或外周血。

3.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述分离的具体步骤为：

4.如权利要求3所述的培养方法，其特征在于，在步骤（1.2）中，所述离心并收集上清血浆时离心参数为800g，15min；所述水浴锅灭活静置后离心为56℃的水浴锅灭活30 min，后4℃静置15min，后1200g，20min条件下离心。

5.如权利要求3所述的培养方法，其特征在于，在步骤（1.3）中，所述加入到高效离心管中离心的参数为800g，25min；所述加入pbs洗涤并离心时离心的参数为500g，10mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：李石英，卓成柳，邓焱滨，陈小川，白有幸，曾达，付雅婷，晏江军，
申请(专利权)人：广东中旭医爱科技有限公司，
类型：发明
国别省市：