一种氧化还原电势提高的云芝来源漆酶突变体及其筛选与制备方法技术

一种氧化还原电势提高的云芝来源漆酶突变体及其筛选与制备方法，属于生物催化技术领域。为了解决漆酶作为氧化酶氧化还原电势低限制了其催化的广谱性的技术问题，本发明专利技术通过分析云芝来源漆酶轴向配位残基与氧化还原电势之间的关系，确定突变位点，并通过预测活性中心Cu1与不同突变体轴向配位残基之间的距离筛选出可进一步改造的突变体，最后通过测定不同突变体的氧化还原电势和对于ABTS的酶活，筛选获得了氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的突变体，该突变体相比于野生型云芝来源漆酶，其氧化还原电势及对于ABTS的酶活都得到了显著提高，具有较高的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物催化，具体涉及一种氧化还原电势提高的云芝来源漆酶突变体及其筛选与制备方法。

技术介绍

1、漆酶(ec1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶，与抗坏血酸氧化酶、哺乳动物血浆铜蓝蛋白和胆红素氧化酶等都属于蓝色多铜氧化酶家族(multi copper oxidase，mco)，广泛存在于多种植物、动物、真菌和细菌中。作为一种环境友好型“绿色催化剂”，漆酶已经用于有机污染物转化、合成染料脱色、造纸废水、食品加工、生物传感器和环境质量指示器等诸多绿色环境化学工程中。

2、漆酶催化的本质是利用铜离子特有的氧化还原能力，对底物进行单电子氧化，同时传递四个电子，将作为第二底物的氧气还原成水。其中，漆酶的氧化还原电势(e0)指的是漆酶从还原性底物捕获一个电子而相应地生成一个阳离子所需要的能量，是衡量其氧化还原能力的重要指标，漆酶分子的e0越高，表明其氧化还原能力越强，其中来自漆树漆酶的t1中心氧化还原电势e0大约是430mv，而云芝漆酶的e0为790mv，高于其他的多铜氧化酶。对于氧化还原电势较低的底物，漆酶可以直接进行氧化，而对于一些氧化还本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种氧化还原电势提高的云芝来源漆酶突变体，其特征在于，所述云芝来源漆酶突变体是以氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的野生型云芝来源漆酶为亲本，将亲本的第463位苯丙氨酸突变为色氨酸。

2.一种编码权利要求1所述云芝来源漆酶突变体的基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

4.一种含有权利要求2或3任一所述基因的重组载体。

5.一种表达权利要求1所述云芝来源漆酶突变体或携带权利要求2或3任一所述基因的重组细胞。

6.权利要求4所述重组载体或权利要求5所述重组细胞在...

【技术特征摘要】

1.一种氧化还原电势提高的云芝来源漆酶突变体，其特征在于，所述云芝来源漆酶突变体是以氨基酸序列如seq id no.1所示的野生型云芝来源漆酶为亲本，将亲本的第463位苯丙氨酸突变为色氨酸。

2.一种编码权利要求1所述云芝来源漆酶突变体的基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq id no.6所示。

4.一种含有权利要求2或3任一所述基因的重组载体。

5.一种表达权利要求1所述云芝来源漆酶突变体或携带权利要求2或3任一所述基因的重组细胞。

6.权利要求4所述重组载体或权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐超，于宗江，咸漠，林欢，
申请(专利权)人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：