【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于法医遗传学检测，涉及一种针对法医现场低浓度dna样本的检测缓冲液，具体为浓缩pcr缓冲液及其应用。
技术介绍
1、短串联重复序列基因座(short tandem repeat，str)作为继限制性片段长度多态性之后的第二代遗传标记，自二十世纪八九十年代以来，被广泛应用于法医物证学方面相关的研究及鉴定，是目前应用最广泛的遗传标记之一。str标记与其他遗传标记物相比，str基因座片段小、容易扩增，更适用于微量和降解检材，且多个str基因座可以同时进行复合扩增，具有快速、高效、准确、灵敏、信息量大等优点，被广泛应用于法医物证中的个体识别和亲缘鉴定。
2、上述pcr复合扩增反应体系的基本成分包括引物、dntps、dna聚合酶、mg2+和模板。引物是含有15-30个碱基的寡核苷酸,能够与模板dna中目标区域的侧翼序列结合；dntps由四种基本核苷酸组成：datp、dctp、dgtp和dttp，是新dna链合成的原料；dna聚合酶是pcr反应的催化剂；mg2+是dna聚合酶的辅助因子，有助于促进dntp的结合；模板即含有目标区域的核酸分子。在pcr反应过程中，dna聚合酶从引物的3’末端开始催化延伸，在mg2+的作用下，以dntps为原料，合成新的dna链；在进行pcr反应时，通常还会添加缓冲液，缓冲液中的成分能够为dna聚合酶提供适宜的化学反应环境，如稳定的ph值范围(ph＝8.0-9.5)和k+等。
3、法医现场的检材，如血痕、精液、唾液、体液、毛发等，常具有dna浓度低、片段长度小等特点。为了提高
技术实现思路
1、解决的技术问题：为了克服现有技术的不足，针对法医现场低浓度、高降解dna检材，一方面能够增加检材的模板添加量，另一方面提高不同来源样本的扩增特异性。鉴于此，本专利技术提供了浓缩pcr缓冲液及其应用。
2、技术方案：浓缩pcr缓冲液，所述浓缩pcr缓冲液包括以下组分：100mm-300mmtris-hcl、50mm-250mm kcl、质量分数0.02-0.05％明胶、5mm-25mm dntps、2mm-20mmmgcl2、2u/μl taq dna聚合酶、体积分数5％-25％甘油、质量分数0.1％-10％聚乙二醇6000。
3、优选的，所述浓缩pcr缓冲液包括添加剂，添加剂为聚乙烯吡咯烷酮、吐温20和牛血清白蛋白中的至少一种。
4、优选的，浓缩pcr缓冲液中，聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.1％-10％，吐温20的体积分数为5％-15％，牛血清白蛋白的质量浓度为1mg/ml-35mg/ml。
5、优选的，所述聚乙烯吡咯烷酮分子量为55000。
6、牛血清白蛋白能够有效提高抗抑制能力，保护dna聚合酶，优选的，所述添加剂为牛血清白蛋白；或牛血清白蛋白和吐温20；或牛血清白蛋白、吐温20和聚乙烯吡咯烷酮55000。
7、优选的，所述浓缩pcr缓冲液包括以下组分：175mm tris-hcl、200mm kcl、质量分数0.035％明胶、15mm dntps、12mm mgcl2、2u/μl taq dna聚合酶、体积分数15％甘油、质量分数2％聚乙二醇6000、体积分数10％吐温20、10mg/ml牛血清白蛋白和质量分数1％聚乙烯吡咯烷酮55000。
8、以上任一所述浓缩pcr缓冲液在pcr反应体系中增加低浓度dna模板初始添加量中的应用。
9、以上任一所述浓缩pcr缓冲液在提高pcr反应特异性中的应用。
10、以上任一所述浓缩pcr缓冲液在提高dna片段检出率中的应用。
11、以上任一所述浓缩pcr缓冲液在法医鉴定中的应用。
12、本专利技术所述浓缩pcr缓冲液工作的原理在于：聚乙二醇能够增加反应体系的粘度，减少引物之间的反应，降低引物二聚体形成的几率，进一步提高引物用量，提升扩增效率。聚乙烯吡咯烷酮是一种具有良好溶解性、成膜性、生物相容性及化学稳定性的高分子化学物，能有效降低dna模板的构象稳定性，使得dna模板易在pcr的变性阶段解链，从而提高pcr扩增效率及特异性。
13、有益效果：(1)本专利技术所述浓缩pcr缓冲液检测法医现场低浓度dna样本时能够增加dna初始模板量，提高检出率，并增强抗抑制能力，提高检材适应性；(2)与传统pcr缓冲液相同的扩增体系中，采用本专利技术所述浓缩pcr缓冲液的体系能够添加更多体积的检测样本，且对提取样本和直扩样本均具有良好的扩增效率；(3)所述浓缩pcr缓冲液具有特异性强、灵敏度高、分型结果准确的优点，完全能够满足实际案件检验、dna数据库建设以及亲缘鉴定的需要。
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1.浓缩PCR缓冲液，其特征在于，所述浓缩PCR缓冲液包括以下组分：100mM-300mMTris-HCl、50mM-250mM KCl、质量分数0.02％-0.05％明胶、5mM-25mMdNTPs、2mM-20mMMgCl2、2U/μL Taq DNA聚合酶、体积分数5％-25％甘油、质量分数0.1％-10％聚乙二醇6000。
2.根据权利要求1所述的浓缩PCR缓冲液，其特征在于，所述浓缩PCR缓冲液包括添加剂，添加剂为聚乙烯吡咯烷酮、吐温20和牛血清白蛋白中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的浓缩PCR缓冲液，其特征在于，浓缩PCR缓冲液中，聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.1％-10％，吐温20的体积分数为5％-15％，牛血清白蛋白的质量浓度为1mg/mL-35mg/mL。
4.根据权利要求2所述的浓缩PCR缓冲液，其特征在于，所述聚乙烯吡咯烷酮为聚乙烯吡咯烷酮55000。
5.根据权利要求2所述的浓缩PCR缓冲液，其特征在于，所述添加剂为牛血清白蛋白；或
6.根据权利要求1所述的浓缩PCR缓冲液，其特征在于，所述
7.权利要求1-6任一所述浓缩PCR缓冲液在PCR反应体系中增加低浓度DNA模板初始添加量中的应用。
8.权利要求1-6任一所述浓缩PCR缓冲液在提高PCR反应特异性中的应用。
9.权利要求1-6任一所述浓缩PCR缓冲液在提高DNA片段检出率中的应用。
10.权利要求1-6任一所述浓缩PCR缓冲液在法医鉴定中的应用。
...【技术特征摘要】
1.浓缩pcr缓冲液，其特征在于，所述浓缩pcr缓冲液包括以下组分：100mm-300mmtris-hcl、50mm-250mm kcl、质量分数0.02％-0.05％明胶、5mm-25mmdntps、2mm-20mmmgcl2、2u/μl taq dna聚合酶、体积分数5％-25％甘油、质量分数0.1％-10％聚乙二醇6000。
2.根据权利要求1所述的浓缩pcr缓冲液，其特征在于，所述浓缩pcr缓冲液包括添加剂，添加剂为聚乙烯吡咯烷酮、吐温20和牛血清白蛋白中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的浓缩pcr缓冲液，其特征在于，浓缩pcr缓冲液中，聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.1％-10％，吐温20的体积分数为5％-15％，牛血清白蛋白的质量浓度为1mg/ml-35mg/ml。
4.根据权利要求2所述的浓缩pcr缓冲液，其特征在于，所述聚乙烯吡咯烷酮为聚乙烯吡咯烷酮55000。
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【专利技术属性】
技术研发人员：王伟，邵泽香，袁春燕，张雷，陈林丽，夏子芳，
申请(专利权)人：江苏安科华捷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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