人冠状病毒RNA依赖性RNA聚合酶的活性报告质粒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人冠状病毒RNA依赖性RNA聚合酶的活性报告质粒pCMV‑5'UTR‑Luc‑3'UTR，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，该活性报告质粒可以指示人冠状病毒的RNA依赖性RNA聚合酶RdRp活性，将RdRp活性报告质粒应用在筛选抗人冠状病毒药物中，实验结果显示通过荧光强度可以直观的观察到待筛选药物的抑制效果，本发明专利技术方法能实现高通量筛选抗人冠状病毒药物，大幅节约筛选抗人冠状病毒药物耗费的时间和成本，且操作简单方便，适于推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物筛选，尤其涉及一种筛选人冠状病毒rna依赖性rna聚合酶（rdrp）活性报告质粒以及活性报告质粒在筛选抗人冠状病毒药物中的应用。

技术介绍

1、冠状病毒是一种单股正链rna病毒，其感染在人类社会历史上爆发了多次疫情，极大的影响了人类的生存和发展。虽然研发出多种冠状病毒的疫苗来阻止冠状病毒的流行，但是由于其基因组的特异性，导致疫苗保护容易失效，因此抗病毒疗法对于降低感染者的发病率和死亡率非常重要。目前fda批准了瑞德西韦作为抗covid-19药物，但研究表明其疗效并不理想，因此为了筛选新的、有效的抗冠状病毒药物来治疗和应对新兴和重新出现的冠状病毒十分重要。

2、hcov-oc43感染主要引起轻度上呼吸道症状，可通过患者的自身免疫治愈，无需特殊治疗，且与sars-cov-2同为β属冠状病毒，核苷酸和氨基酸序列的比较表明，这两种病毒在涉及病毒复制和发病机制的重要基序(如 rdrp、解旋酶基序和 3clpro)中具有广泛的同一性，且没有iii级生物实验室限制的缺点，因此是一个良好的高通量药物筛选模型。冠状病毒非结构蛋白12（nsp12本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种人冠状病毒RNA依赖性RNA聚合酶的活性报告质粒pCMV-5'UTR-Luc-3'UTR，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.权利要求1所述的人冠状病毒RNA依赖性RNA聚合酶的活性报告质粒在筛选抗人冠状病毒药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：使用时，将活性报告质粒pCMV-5'UTR-Luc-3'UTR、表达质粒pCMV-nsp12共同用于筛选抗人冠状病毒药物，将两个质粒同时转染至HEK-293T细胞中，添加待筛药物，同时设置不添加药物对照组，转染后使用酶标仪检测萤火虫荧光素酶活性，当药物添加组细胞的萤火虫荧光素酶活性低...

【技术特征摘要】

1.一种人冠状病毒rna依赖性rna聚合酶的活性报告质粒pcmv-5'utr-luc-3'utr，其核苷酸序列如seq id no:1所示。

2.权利要求1所述的人冠状病毒rna依赖性rna聚合酶的活性报告质粒在筛选抗人冠状病毒药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：使用时，将活性报告质粒pcmv-5'utr-luc-3'utr、表达质...

【专利技术属性】
技术研发人员：张阿梅，康露璐，施秋梅，夏雪山，董书维，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：