【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及过表达cygb的慢病毒载体在修复工程材料中的应用。
技术介绍
1、脂肪组织是人体最大的内分泌器官，在调节能量平衡和脂质稳态方面起着核心作用，并参与各种生理过程，如保护内脏器官、调节代谢和免疫等；因而，脂肪组织也成为软组织修复重建的理想材料。目前，脂肪移植在修复术后或外伤性缺损、疤痕治疗中被广泛应用，但依然存在移植物存活率低、技术要求高、不可控并发症、远期稳定性差等问题。脂肪组织工程的出现被认为是一种极具潜力的新治疗策略，在植入物功能及移植物存活率方面具有较强的可塑性，如何在体内形成与正常脂肪组织相似的组织工程脂肪是有待克服的临床问题。
2、脂肪组织工程主要由种子细胞、诱导因子和支架构成，脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，adscs)由于具有优先分化为脂肪细胞的能力，被认为是脂肪组织工程中种子细胞的最优选择，其优良的自我增殖活性和脂肪生成对于维持组织稳态、促进细胞更新和促进自我修复至关重要。
3、细胞珠蛋白(cytoglobin，cygb)基因是人体固有的保护性蛋白，对机体无毒副作用。细胞珠蛋白最初由kawada等在大鼠hsc中发现，其在硫代乙酰胺胁迫诱导的纤维化肝脏星状细胞(hsc)中表达明显增加，因而起初被命名为hsc激活相关蛋白(stellate cellactivation-associated protein，stap)。蛋白测序表明它属于新的一类含血红素的六配位蛋白(hexacoordinate globin super-famil
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于利用过表达cygb的慢病毒载体修饰脂肪干细胞，促进脂肪干细胞增殖及成脂分化，形成组织工程脂肪，作为植入材料修复组织缺损。
2、本专利技术提供一种过表达cygb的慢病毒载体在修复组织缺损的工程材料中的应用。
3、在一种具体的实施方式中，所述组织缺损为皮肤软组织缺损。
4、在一种具体的实施方式中，所述过表达cygb的慢病毒载体为h-plvx-ef1a-egfp-2a-puro-cmv-cygb-ha，其中，plvx为慢病毒载体，cygb由cmv启动子驱动表达，egfp-2a-puro基因由ef1a启动子驱动表达，且有绿色荧光和嘌呤霉素抗性。
5、在一种具体的实施方式中，所述cygb的序列如seq id no.1所示，所述过表达cygb的慢病毒载体的序列如seq id no.2所示。
6、在一种具体的实施方式中，所述过表达cygb慢病毒载体的构建方法具体为：利用同源重组将人源cygb连接至plvx-ef1a-egfp-2a-puro-cmv-mcs慢病毒载体中，构建得到过表达cygb的慢病毒载体。
7、本专利技术还提供一种包含过表达的cygb慢病毒载体的脂肪干细胞在修复组织缺伤的工程材料中的应用。
8、在一种具体的实施方式中，所述过表达cygb的慢病毒载体为h-plvx-ef1a-egfp-2a-puro-cmv-cygb-ha，其中，plvx为慢病毒载体，cygb由cmv启动子驱动表达，egfp-2a-puro基因由ef1a启动子驱动表达，且有绿色荧光和嘌呤霉素抗性。
9、在一种具体的实施方式中，所述cygb的序列如seq id no.1所示，所述过表达cygb的慢病毒载体的序列如seq id no.2所示。
10、在一种具体的实施方式中，包含过表达cygb慢病毒载体的脂肪干细胞的制备方法，包括以下步骤：
11、步骤(1)、利用同源重组将人源cygb连接至plvx-ef1a-egfp-2a-puro-cmv-mcs慢病毒载体中，构建得到过表达cygb的慢病毒载体；
12、步骤(2)、利用pspax2和pmd2.g对所述过表达cygb的慢病毒载体进行包装；
13、步骤(3)、利用包装后的过表达cygb的慢病毒载体转染脂肪干细胞获得包含过表达cygb的慢病毒载体的脂肪干细胞。
14、在一种具体的实施方式中，所述步骤(3)中慢病毒转染复数moi为50。
15、本专利技术的有益效果至少包括：
16、一、本专利技术首次发现adscs成脂分化过程中cygb蛋白显著上调，这样，cygb基因过表达修饰的adscs在作为脂肪组织工程种子细胞中有应用潜力。
17、二、本专利技术利用过表达cygb的慢病毒载体转染脂肪干细胞，获得的包含过表达cygb的慢病毒载体的脂肪干细胞能够促进脂肪干细胞增殖及成脂分化，这样，一方面，包含过表达cygb的慢病毒载体的脂肪干细胞能够形成组织工程脂肪，作为植入材料填充至组织缺损的部位，对组织缺损进行修复，另一方面还可以为脂肪组织工程种子细胞功能的优化提供参考依据。
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1.一种过表达CYGB的慢病毒载体在修复组织缺损的工程材料中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组织缺损为皮肤软组织缺损。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述过表达CYGB的慢病毒载体为H-pLVX-EF1a-EGFP-2A-PURO-CMV-CYGB-HA，其中，pLVX为慢病毒载体，CYGB由CMV启动子驱动表达，EGFP-2A-PURO基因由EF1a启动子驱动表达，且有绿色荧光和嘌呤霉素抗性。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述CYGB的序列如SEQ ID NO.1所示，所述过表达CYGB的慢病毒载体的序列如SEQ ID NO.2所示。
5.根据权利要求1至4任一项所述的应用，其特征在于，所述过表达CYGB的慢病毒载体的构建方法具体为：利用同源重组将人源CYGB连接至pLVX-EF1a-EGFP-2A-PURO-CMV-MCS慢病毒载体中，构建得到过表达CYGB的慢病毒载体。
6.一种包含过表达CYGB的慢病毒载体的脂肪干细胞在修复组织缺伤的工程材料中的应用。
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