【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学检测，具体涉及一种双模态生物传感器及其在检测ota中的应用。
技术介绍
1、赭曲霉毒素通常由真菌中的曲霉属和青霉菌属产生，而赭曲霉毒素a(ota)是7种赭曲霉毒素结构类似物中毒素最强的一种，在自然界中分布最为广泛，同时污染农作物程度最为严重。在毒理学研究中，ota常表现出对肾、肝脏、肺等器官有害，它会对人体和哺乳动物的免疫系统及其功能产生危害，导致机体免疫力下降甚至诱发癌症以及胎儿畸形等。此外，ota作为神经性毒素的一种，会一定程度上诱发神经细胞凋亡并阻止神经组织再生，因此会加大阿尔兹海默症和帕金森等神经性退行性疾病的发生概率。由于低剂量的ota也会在人体内积累，进而对人类的健康产生一系列负面影响，国际癌症研究机构已经将ota划分定义为2b类潜在的致癌物质。
2、传统的检测方法有色谱分析法、质谱测定法等。这些方法因具有较高的准确性、灵敏度以及可靠性，通常被当作是标准检测方法，因此应用非常广泛。然而，以上这些检测方法大多需要较为昂贵的精密仪器、较为繁琐的样品前处理方法和具备有相关专业技能知识的专业检测人员，使得快速、高通量的ota检测实现较为困难。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的在于提供一种双模态生物传感器及其在检测ota中的应用，以实现对ota的直接、快速和敏感检测，从而克服现有技术的不足。
2、为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：
3、本专利技术实施例提供了一种双模态生物传感器，用于检测ota，
4、其中，所述rca等温扩增体系包括挂锁模板探针、dna连接酶、dna聚合酶、dntp及限制性核酸内切酶；所述crispr/cas12a体系包括crispr缓冲溶液、cas12a蛋白、crrna、荧光型探针、试纸条型探针。
5、本专利技术实施例还提供了前述的双模态生物传感器在检测ota中的应用。
6、本专利技术实施例还提供了一种基于适配体介导的rca结合crispr/cas12a检测ota的方法，其包括：
7、将待测样品、ota适配体、rca等温扩增体系混合进行反应，获得中间产物探针；
8、以及，将所述中间产物探针与crispr/cas12a体系混合并进行孵育，之后对所获产物进行荧光检测及胶体金免疫层析试纸检测，从而实现待测样品中ota的双模态检测；
9、其中，所述rca等温扩增体系包括挂锁模板探针、dna连接酶、dna聚合酶、dntp及限制性核酸内切酶；所述crispr/cas12a体系包括crispr缓冲溶液、cas12a蛋白、crrna、荧光型探针、试纸条型探针。
10、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
11、(1)本专利技术基于ota适配体的鉴定过程确保了分析的特异性；
12、(2)本专利技术使用rca等温扩增和crispr技术相结合进行双重信号放大，增强了灵敏度，检测限低至0.17fg/ml；
13、(3)本专利技术使用荧光和胶体金试纸条可视化的双重信号输出方式；
14、(4)本专利技术荧光信号输出模块为“signal-off”模式，而胶体金信号输出模块为“signal-on”模式，荧光信号的变化趋势和胶体金信号变化趋势相反，实现了双模态检测；
15、(5)本专利技术提供的检测方法不仅仅适用于ota的检测，还可以用于其他待测目标物的检测，只需要根据不同的待测目标物设计相应的特异性结合的核酸适配体替换即可，本专利技术的双模态生物传感器的应用前景较为广泛。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种双模态生物传感器，用于检测OTA，其特征在于，包括：OTA适配体、RCA等温扩增体系、CRISPR/Cas12a体系；
2.根据权利要求1所述的双模态生物传感器，其特征在于：所述OTA适配体具有如SEQID NO.1所示的序列；
3.根据权利要求1所述的双模态生物传感器，其特征在于：所述DNA连接酶包括T4 DNA连接酶；
4.权利要求1-3中任一项所述的双模态生物传感器在检测OTA中的应用。
5.一种基于适配体介导的RCA结合CRISPR/Cas12a检测OTA的方法，其特征在于，包括：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述OTA适配体具有如SEQ ID NO.1所示的序列；
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述DNA连接酶包括T4 DNA连接酶；
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述胶体金免疫层析试纸包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和底板；所述硝酸纤维素膜设有检测线和质控线；所述检测线固定有链酶亲和素；所述质控线固定有FITC抗体。
9.根据权
10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，具体包括：将所述中间产物与CRISPR/Cas12a体系混合并于35-37℃孵育1h，之后于65-80℃加热10-15min终止反应，之后测量所获产物于520nm处的荧光特征峰值以及进行胶体金免疫层析试纸检测；
...【技术特征摘要】
1.一种双模态生物传感器，用于检测ota，其特征在于，包括：ota适配体、rca等温扩增体系、crispr/cas12a体系；
2.根据权利要求1所述的双模态生物传感器，其特征在于：所述ota适配体具有如seqid no.1所示的序列；
3.根据权利要求1所述的双模态生物传感器，其特征在于：所述dna连接酶包括t4 dna连接酶；
4.权利要求1-3中任一项所述的双模态生物传感器在检测ota中的应用。
5.一种基于适配体介导的rca结合crispr/cas12a检测ota的方法，其特征在于，包括：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述ota适配体具有如seq id no.1所示的序列；
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述dna连接酶包括t4 dna连接酶；
8.根据权利要求5所述的方法，...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟，陈琦，彭育勃，王师沂，徐昊阳，姚帮本，闫超，秦盼柱，陈赵然，孙思颖，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：
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