一种利用yhaK基因的产虾青素的大肠杆菌工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种利用yhaK提高虾青素产量的大肠杆菌工程菌及其构建方法和应用。所述工程菌中包括含yhaK基因，编码虾青素合成酶的crtS基因，编码细胞色素还原酶的crtR基因，编码番茄红素环化酶的crtYB基因以及编码法呢基/香叶基焦磷酸合酶IspA的基因片段的重组质粒，最终得到了一株高产虾青素的大肠杆菌工程菌株ELZSS02 E.coli Bl21(DE3)::pTrc low‑MvaE‑MvaS/pET‑RPlyc‑crtS/pACYC‑crtR‑crtYB‑IspA‑yhaK，相较于野生型大肠杆菌，工程菌株中MEP途径基因表达量显著提高，虾青素产量相也显著提高，具有良好的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程和分子生物学，具体涉及一种利用无缝克隆构建的产虾青素的大肠杆菌工程菌及其构建方法和应用。

技术介绍

1、虾青素是一种强效的抗氧化剂，其抗氧化活性远超维生素c、维生素e等常见抗氧化剂。

2、这种特性使得虾青素在抵抗氧化应激、保护细胞健康方面具有重要作用。

3、除了抗氧化性外，虾青素还具有抗炎、抗癌、增强免疫力等多种生物活性。

4、这些活性使得虾青素在医药、保健品、化妆品等领域具有广泛的应用前景。

5、例如，虾青素可以抑制肿瘤发生、增强免疫力、清除体内自由基等，随着技术的进步和市场需求的增长，虾青素产业呈现出快速发展的态势。

6、微生物主要通过mep途径合成虾青素，mep途径是一条以丙酮酸和3-磷酸甘油醛为原料，经过一系列酶促反应合成异戊烯焦磷酸（ipp）和二甲烯丙基焦磷酸（dmapp）的代谢途径。

7、这些产物是生物合成类异戊二烯及其衍生物（如类胡萝卜素、虾青素等）的前体物质。

8、目前调控mep途径的基因未见报道。

9、yhak基因编码的p本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高产虾青素的大肠杆菌，其特征在于：所述大肠杆菌工程菌是由含类胡萝卜素操纵子基因片段（lyc）和编码虾青素合成酶基因片段（crtS）的表达载体，含编码细胞色素还原酶（crtR）的基因片段，编码番茄红素环化酶（crtYB）的基因片段以及yhaK基因的表达载体构建获得的。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述类胡萝卜素操纵子基因片段为碱基序列如SEQ ID NO.1所示的lyc基因片段，其来自于沼泽红假单胞菌。

3.根据权利要求1 所述的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述编码虾青素合成酶的基因片段为碱基序列如SEQ ID NO.2所示的crtS...

【技术特征摘要】

1.一种高产虾青素的大肠杆菌，其特征在于：所述大肠杆菌工程菌是由含类胡萝卜素操纵子基因片段（lyc）和编码虾青素合成酶基因片段（crts）的表达载体，含编码细胞色素还原酶（crtr）的基因片段，编码番茄红素环化酶（crtyb）的基因片段以及yhak基因的表达载体构建获得的。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述类胡萝卜素操纵子基因片段为碱基序列如seq id no.1所示的lyc基因片段，其来自于沼泽红假单胞菌。

3.根据权利要求1 所述的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述编码虾青素合成酶的基因片段为碱基序列如seq id no.2所示的crts基因片段，其来自于红法夫酵母。

4.根据权利要求1所述的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述编码细胞色素还原酶的基因片段为碱基序列如seq id no.3所示的crtr的基因片段，其来自于红法夫酵母。

5.根据权利要求1所述的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述编码番茄红素环化酶的基因片段为碱基序列如seq id no.4所示的crtyb的基因片段，其来自于红法夫酵母。

6.根据权利要求1所述的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述表达载体还包括编码法呢基/香叶基焦磷酸合酶的基因片段碱基序列如seq id no.5所示的ispa，其来自于大肠杆菌。

7.根据权利要求1所述的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述yhak的基因片段为核苷酸序列如seq id no.6所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.7所示，其来自于大肠杆菌。

8.根据权利1-7所述的大肠杆菌工程菌的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

9.（2）扩增编码细胞色素还原酶的基因片段crtr，番茄红素环化酶的基因片段crtyb以及编码法呢基/香叶基焦磷酸合酶的基因片段ispa将三者进行连接，连接产物转化感受...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨建明，李美洁，张诗裳，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：