【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于酶工程领域，涉及酶活性的改造，具体涉及一种提高赭曲霉毒素a降解酶热稳定性和酸性降解性能的方法，以及一种热稳定性和酸性降解性能提高的赭曲霉毒素a降解酶突变体及其制备方法与应用。
技术介绍
1、随着社会的不断进步，人们的生活质量也在提高，对于食品卫生安全方面有了更高的要求。真菌毒素是由曲霉、镰刀菌和青霉等丝状真菌合成的次生代谢产物，可引起人畜严重疾病。这些产生真菌毒素的真菌会污染食品和饲料，造成社会经济和健康影响。赭曲霉毒素是一类重要的共生毒素，目前已发现20多种赭曲霉毒素，其中赭曲霉毒素a(ota)毒性最强，在谷物中赭曲霉毒素a的发生率最高，其次是在植物性食品中(啤酒、咖啡等)。由于赭曲霉毒素a具有强大的稳定性，会存在于组织、动物和乳制品中，因此赭曲霉毒素a具有较高的生物积累效率，并在食物链中传播，对人类和动物都具有致癌性、肾毒性、肝毒性、遗传毒性和神经毒性。
2、酶法降解赭曲霉毒素a是一种绿色、环保的方法。现在降解赭曲霉毒素a的酶一般在中性或者弱碱性条件下有较高的酶活。而在猪进食后，胃内的ph一般为4.2左右，此时，已有的赭曲霉毒素a降解酶的酶活低，不能高效降解赭曲霉毒素a。在猪的胃内实现高效降解赭曲霉毒素a，是一种科学可行的方法。与通过物理法或者化学法降解赭曲霉毒素a相比，酶法降解具有成本低、无污染、易于处理、操作便捷等优点，更有前景实现高效降解等优势。
3、因此，如何提供一种在动物体内高效降解赭曲霉毒素a降解酶是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路b>
1、本专利技术的目的在于解决现有技术存在的问题，提供一种提高赭曲霉毒素a降解酶热稳定性和酸性降解性能的方法，以及提供一种热稳定性和酸性降解性能提高的赭曲霉毒素a降解酶突变体及其制备方法与应用。
2、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
3、一种提高赭曲霉毒素a降解酶热稳定性和酸性降解性能的方法，包括将野生型赭曲霉毒素a降解酶的第113位谷氨酰胺突变为脯氨酸、第210位丝氨酸突变为甲硫氨酸、第235位丙氨酸突变为酪氨酸、第372位甘氨酸突变为精氨酸，所述野生型赭曲霉毒素a降解酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。
4、一种提高赭曲霉毒素a降解酶热稳定性的方法，包括将野生型赭曲霉毒素a降解酶的第113位谷氨酰胺突变为脯氨酸、第210位丝氨酸突变为甲硫氨酸、第235位丙氨酸突变为酪氨酸，所述野生型赭曲霉毒素a降解酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。
5、一种赭曲霉毒素a降解酶突变体，其为突变体e1或突变体e2-2。其中，所述突变体e1的氨基酸序列如seq id no.3所示，该突变体与野生型赭曲霉毒素a降解酶相比发生了组合突变q113p/s210m/a235y。所述突变体e2-2的氨基酸序列如seq id no.7所示，该突变体与野生型赭曲霉毒素a降解酶相比发生了组合突变q113p/s210m/a235y/g372r。
6、一种上述赭曲霉毒素a降解酶突变体的编码基因。所述的突变体e1编码基因的核苷酸序列优选如seq id no.4所示。所述的突变体e2-2编码基因的核苷酸序列优选如seqid no.8所示。
7、一种表达上述赭曲霉毒素a降解酶突变体的重组载体，其含有所述赭曲霉毒素a降解酶突变体的编码基因。进一步的，所述的重组表达载体以pet-28a为基础载体。
8、一种表达赭曲霉毒素a降解酶突变体的重组菌株，其含有所述赭曲霉毒素a降解酶突变体的编码基因或含有上述重组载体。进一步的，所述的重组表达菌株以大肠杆菌为宿主。
9、上述赭曲霉毒素a降解酶突变体的制备方法，包括以下步骤：将表达赭曲霉毒素a降解酶突变体的重组菌株进行培养、诱导表达，得到含赭曲霉毒素a降解酶突变体的发酵产物。进一步的，所述的制备方法还包括破碎、纯化的步骤。
10、上述赭曲霉毒素a降解酶突变体在降解赭曲霉毒素a或制备降解赭曲霉毒素a的产品中的应用。
11、上述赭曲霉毒素a降解酶突变体在制备食品添加剂中的应用。
12、上述赭曲霉毒素a降解酶突变体在制备饲料添加剂中的应用。
13、一种降解赭曲霉毒素a的添加剂，包含上述赭曲霉毒素a降解酶突变体。
14、本专利技术的优点和有益效果：本专利技术将赭曲霉毒素a降解酶进行q113p/s210m/a235y/g372r组合突变，提高了突变体酶的热稳定性以及酸性降解性能。本专利技术提供的赭曲霉毒素a降解酶突变体e2-2在60℃的热稳定性比初始野生型赭曲霉毒素a降解酶的半衰期时间延长了将近3.4min，在胃内(37℃、ph4.2)条件下的比酶活从2.62u/mg增加到18.81u/mg，该突变体可用于制备食品添加剂或饲料添加剂以降低赭曲霉毒素a的生物积累效率。
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1.一种提高赭曲霉毒素A降解酶热稳定性和酸性降解性能的方法，其特征在于，包括：将野生型赭曲霉毒素A降解酶的第113位谷氨酰胺突变为脯氨酸、第210位丝氨酸突变为甲硫氨酸、第235位丙氨酸突变为酪氨酸、第372位甘氨酸突变为精氨酸，所述野生型赭曲霉毒素A降解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种提高赭曲霉毒素A降解酶热稳定性的方法，其特征在于，包括：将野生型赭曲霉毒素A降解酶的第113位谷氨酰胺突变为脯氨酸、第210位丝氨酸突变为甲硫氨酸、第235位丙氨酸突变为酪氨酸，所述野生型赭曲霉毒素A降解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种赭曲霉毒素A降解酶突变体，其特征在于：所述的突变体为氨基酸序列如SEQ IDNO.3所示的突变体E1，或所述的突变体为氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的突变体E2-2。
4.一种权利要求3所述的赭曲霉毒素A降解酶突变体的编码基因，其特征在于：
5.一种表达权利要求3所述的赭曲霉毒素A降解酶突变体的重组载体，其特征在于：含有所述赭曲霉毒素A降解酶突变体的编码基因。
...【技术特征摘要】
1.一种提高赭曲霉毒素a降解酶热稳定性和酸性降解性能的方法，其特征在于，包括：将野生型赭曲霉毒素a降解酶的第113位谷氨酰胺突变为脯氨酸、第210位丝氨酸突变为甲硫氨酸、第235位丙氨酸突变为酪氨酸、第372位甘氨酸突变为精氨酸，所述野生型赭曲霉毒素a降解酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.一种提高赭曲霉毒素a降解酶热稳定性的方法，其特征在于，包括：将野生型赭曲霉毒素a降解酶的第113位谷氨酰胺突变为脯氨酸、第210位丝氨酸突变为甲硫氨酸、第235位丙氨酸突变为酪氨酸，所述野生型赭曲霉毒素a降解酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。
3.一种赭曲霉毒素a降解酶突变体，其特征在于：所述的突变体为氨基酸序列如seq idno.3所示的突变体e1，或所述的突变体为氨基酸序列如seq id no.7所示的突变体e2-2。
4.一种权利要求3所述的赭曲霉毒素a降解酶突变体...
【专利技术属性】
技术研发人员：游锡火，多杰仁青，才让周在，切德力，王俊杰，白婷，薛栋升，黄杰，
申请(专利权)人：武汉纺织大学，
类型：发明
国别省市：
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