【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物遗传转化，具体涉及一种快速获得柑橘砧木遗传转化根系的方法及其应用。
技术介绍
1、柑橘砧木在提升柑橘品质、增强抗病性和抗逆性方面发挥着至关重要的作用，而砧木的根系则是其中的核心部分。柑橘根系在柑橘生长和发育过程中不仅吸收土壤中的水分和矿物质营养，确保柑橘获得足够的养分以支持柑橘地健康生长，还为固定柑橘提供机械支撑，防止因风吹或水流冲击而倒伏。根系通过与土壤中的微生物形成复杂的互利关系，提高了养分的有效利用率，并增强了柑橘的抗病性和抗逆性。此外，根系还参与合成和贮存有机物质，调控柑橘体内的代谢过程，分泌化学物质抑制病原菌和害虫的生长，起到保护作用。总之，柑橘根系在保证柑橘健康生长、提高抗逆性和促进土壤健康方面具有不可替代的重要性。
2、通过柑橘根系进行遗传转化可显著提升砧木的品质，同时不改变接穗苗木的遗传信息，从而为柑橘的推广和应用开辟巨大的空间。如，通过根系遗传转化改良的砧木能够促进接穗苗木的健康生长，优化营养吸收效率，提升果实的风味、甜度、酸度和质地；同时，通过对柑橘根系进行遗传转化引入抗病基因，使砧木具备更强的抗病能力，减少农药使用，降低生产成本和环境影响，提升果实安全性和市场竞争力；再者，改良后的砧木根系能够更好地适应干旱、盐碱、低温和高温等不利环境条件，增强植株的抗逆性，扩大柑橘的种植区域。
3、传统遗传转化根系的获得主要通过根癌农杆菌或发根农杆菌介导的遗传转化组织培养获得，发根农杆菌在遗传根系转化方面，比根癌农杆菌表现更有优势，但整体遗传转化过程相似，都要经过以下过程：材料选择
4、高压繁殖盒是园艺花卉类植物的一种繁殖手段，但在柑橘繁殖中主要采用实生苗培育、嫁接和扦插等传统方法，至今尚未有将高压繁殖盒应用于柑橘遗传转化方面的相关研究。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种柑橘属植物的遗传转化方法，所述遗传转化方法可有效缩短转化体系周期，降低遗传转化成本、提高遗传转化效率、避免嵌合体生成且材料可重复利用。
2、本专利技术提供了一种柑橘属植物的遗传转化方法，包括如下步骤：
3、在柑橘属植物苗的茎上制造伤口，得到带有伤口的柑橘属植物苗；
4、将浸润有侵染液的吸湿性材料覆盖在柑橘属植物苗的伤口上，所述侵染液包括含有待转基因的发根农杆菌k599；
5、覆盖不少于20min后，在伤口位置固定装有植物培养基质的高压繁殖盒，得到固定有高压繁殖盒的柑橘属植物苗；
6、将所述固定有高压繁殖盒的柑橘属植物苗培养至伤口处长出根后，得到生根的柑橘属植物茎段。
7、优选的，所述伤口处长出根后，在毛状根下部剪断，得到生根的柑橘属植物茎段；
8、将所述生根的柑橘属植物茎段进行移栽，得到遗传转化后的柑橘属植株。
9、优选的，所述制造伤口的方法包括剥离树皮或深切伤口；所述剥离树皮的宽度为环剥周长的1/4～1/3，剥下树皮的长度为1～2cm；所述深切伤口的数量为5～10处，深度为至暴露木质部cm。
10、优选的，在伤口位置处固定装有植物营养基质的高压繁殖盒后，在高压繁殖盒内加入1～2ml的侵染液。
11、优选的，所述生根的柑橘属植物茎段的根系长度≥8cm，分生根≥5条。
12、优选的，所述柑橘属植物苗的苗龄≥2年。
13、优选的，每一株柑橘属植物苗上固定不少于1个高压繁殖盒。
14、优选的，所述吸湿性材料包括纸和/或纱布。
15、优选的，所述柑橘属植物包括香橼、枳橙、枳和柠檬中的一种或多种。
16、本专利技术还提供了上述技术方案所述的遗传转化方法在基因功能验证中的应用。
17、有益效果：
18、本专利技术提供了一种柑橘属植物的遗传转化方法，包括如下步骤：在柑橘属植物苗的茎上制造伤口，得到带有伤口的柑橘属植物苗；将浸润有侵染液的吸湿性材料覆盖在柑橘属植物苗的伤口上，所述侵染液包括含有待转基因的发根农杆菌k599；覆盖不少于20min后，在伤口位置固定装有植物培养基质的高压繁殖盒，得到固定有高压繁殖盒的柑橘属植物苗；将所述固定有高压繁殖盒的柑橘属植物苗培养至伤口处长出根后，得到生根的柑橘属植物茎段。本专利技术所述遗传转化方法以发根农杆菌k599作为媒介，将侵染液通过柑橘属植物的伤口处进行转导，可以快速将侵染液转染至柑橘属植物的茎段中，最后利用高压繁殖方式可以快速获得遗传转化的柑橘属植株。本专利技术所述方法可有效缩短转化体系周期、降低遗传转化成本、提高遗传转化效率、避免嵌合体生成且材料可重复利用等优点。
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1.一种柑橘属植物的遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述伤口处长出根后，在毛状根下部剪断，得到生根的柑橘属植物茎段；将所述生根的柑橘属植物茎段进行移栽，得到遗传转化后的柑橘属植株。
3.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述制造伤口的方法包括剥离树皮或深切伤口；所述剥离树皮的宽度为环剥周长的1/4～1/3，剥下树皮的长度为1～2cm；所述深切伤口的数量为5～10处，深度至暴露木质部。
4.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，在伤口位置处固定装有植物营养基质的高压繁殖盒后，在高压繁殖盒内加入1～2mL的侵染液。
5.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述生根的柑橘属植物茎段的根系长度≥8cm，分生根≥5条。
6.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述柑橘属植物苗的苗龄≥2年。
7.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，每一株柑橘属植物苗上固定不少于1个高压繁殖盒。
8.根据权利要求1所述
9.根据权利要求1～8任一项的遗传转化方法，其特征在于，所述柑橘属植物包括香橼、枳橙、枳和柠檬中的一种或多种。
10.权利要求1～9任一项所述的遗传转化方法在基因功能验证中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种柑橘属植物的遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述伤口处长出根后，在毛状根下部剪断，得到生根的柑橘属植物茎段；将所述生根的柑橘属植物茎段进行移栽，得到遗传转化后的柑橘属植株。
3.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述制造伤口的方法包括剥离树皮或深切伤口；所述剥离树皮的宽度为环剥周长的1/4～1/3，剥下树皮的长度为1～2cm；所述深切伤口的数量为5～10处，深度至暴露木质部。
4.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，在伤口位置处固定装有植物营养基质的高压繁殖盒后，在高压繁殖盒内加入1～2ml的侵染液...
【专利技术属性】
技术研发人员：段硕，张斯羽，李敏，吴亚晓，罗瑞芳，张婷婷，
申请(专利权)人：赣南师范大学，
类型：发明
国别省市：
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