一种检测血浆中药物的前处理方法和检测方法技术

技术编号：44803721 阅读：11 留言：0更新日期：2025-03-28 19:52

本发明专利技术属于药物检测领域，具体公开了一种检测血浆中药物的前处理方法和检测方法。该前处理方法包括以下步骤：将去除蛋白质后的包括二甲双胍、阿立哌唑或氨磺必利小分子药物的血浆样本与羧基化的TiO<subgt;2</subgt;@MWCNTs混合进行固相分散萃取，得到上清液，作为后续LC‑MS/MS的进样样本进行检测。本发明专利技术采用羧基化改性的TiO<subgt;2</subgt;@MWCNTs作为固相分散萃取的萃取/吸附材料，大幅减少了磷脂等基质干扰，减少了后续检测分析过程中离子抑制现象及背景噪音对小分子药物的定量影响，提高了LC‑MS/MS检测中的灵敏度，扩大了线性检测范围；此外，本发明专利技术的方法简便快捷，成本低。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物检测领域，具体涉及一种检测血浆中药物的前处理方法和检测方法。

技术介绍

1、液相色谱-质谱联用技术(lc-ms/ms)具有高特异性、高灵敏度和多分析物潜力的特性，在常规临床实验室中的应用越来越广泛。样本的前处理对lc-ms/ms检测来说是必要的，因为未经处理的血浆或尿液样本直接进入电离源，这些样品中的干扰物质(如氢、钠和铵等)会引起待测物离子的抑制或增强。在干扰物质中，临床样品中常见的磷脂对离子的抑制作用影响很大。基质效应可能会影响生物分析方法的精密度和准确度，从而影响结果的质量。

2、常用的样本前处理方法包括：蛋白沉淀法(ppt)、液液萃取法(lle)、固相萃取法(spe)等。在多篇文献中报道，相对于spe和lle技术，ppt处理后的提取物中所含的抑制分析物电离的物质最多。在现有技术中，使用纯乙腈从二氧化硅基吸附剂上洗脱药物是一种策略，可以减少磷脂从而减少基质效应。另一种减少基质效应的策略是在spe过程中使用甲醇含量低于50％的meoh:h2o溶液从二氧化硅和聚合物基吸附剂上洗脱药物，从而消除提取物中的溶血磷脂酰胆碱(lpc)。选择有机溶剂和优化lle的ph值也是尽量减少磷脂提取和基质效应的策略。通过使用氯丁烷或mtbe：氯丁烷80:20％(v/v)作为萃取溶剂，可以减少或消除lle中溶血磷脂酰胆碱(lpc)和磷脂酰胆碱(pc)产生的基质效应。此外，氧化锆涂层颗粒的混合spe-ppt平台能够有效提取磷脂；captiva nd脂质过滤板可从生物体液中去除lpc和pc，而不会保留目标分析物。

<p>3、虽然在spe中使用甲醇含量低于50％的洗脱液将药物洗脱消除提取物中的磷脂酰胆碱，但这可能会显著影响药物的回收率。应用lle技术提取基质中的待测物十分干净，也是去除磷脂最彻底的一种萃取方式，但lle包含了选择适合的萃取溶液、萃取、取上清后多数要挥干复溶等操作，整个操作消耗时间多达几个小时。这些流程相关的手工操作既繁琐又耗时。

技术实现思路

1、本专利技术的目的是解决现有技术的不足，提供一种快速、便捷、高效的检测血浆中药物的前处理方法和检测方法。基于此，本专利技术的第一方面提供了一种检测血浆中药物的前处理方法，包括以下步骤：将去除蛋白质后的血浆样本与复合材料混合进行固相分散萃取，得到上清液；

2、所述血浆样本包括小分子药物，所述小分子药物为二甲双胍、阿立哌唑或氨磺必利；

3、所述复合材料为羧基化的tio2@mwcnts；tio2@mwcnts为tio2包覆的多壁碳纳米管。

4、本专利技术采用羧基化改性的tio2@mwcnts作为固相分散萃取的萃取/吸附材料，其通过键合到多壁碳纳米管表面的钛原子作为路易斯酸，利用高选择性的路易斯酸碱相互作用的特性与血浆样品中的磷脂组分相互作用，从而实现从血浆样品中去除磷脂的目的；同时利用多壁碳纳米管比表面积大的特点，吸附血浆样品中其它基质干扰物质，从而减少后续检测分析过程中离子抑制现象及背景噪音对分析物(小分子药物)的定量影响。而且，由于磷脂是一类具有磷酸基团的两性化合物，既含有脂肪酸链组成的疏水尾(hydropholilictail)，又具有由磷酸相连的取代基团构成的亲水头，因此在一般情况下不显示电性；而本专利技术采用的羧基化改性的tio2@mwcnts在固相分离过程中，钛原子能够与磷酸基团键合，而羧基则可以与三甲胺基团中正电荷的氮原子结合，从而能够进一步提升磷脂的吸附分离效果，从而进一步减少后续检测过程中磷脂对分析物(小分子药物)的影响。

5、此外，本专利技术采用的羧基化改性的tio2@mwcnts相比于纯的二氧化钛也能够显示出更强的电负性，在血浆环境下更不容易发生团聚，分散性更好；对磷脂也具有更为优异的吸附性能。本专利技术的前处理方法相比于
技术介绍
中的ppt法仅多一次涡旋离心，简便快捷，而且前处理方法过程中仅需要少量的羧基化改性的tio2@mwcnts，低至2mg，成本较低。

6、其中，根据实验探究，本专利技术的前处理方法只能适用于二甲双胍(met)、氨磺必利(a sp)、阿立哌唑(apz)三种药物的uplc-ms/ms定量检测；对于其他小分子药物则无法适用，例如姜黄素和奥美拉唑。

7、此外，可能是由于氨磺必利带有磺酸基团，无论是基质效应还是准确度、精密度，本专利技术的前处理方法适用于氨磺必利时效果更佳。

8、在一些优选的实施情况中，上述复合材料的制备方法包括以下步骤：将钛酸四丁酯与硝酸在水溶液体系中于70℃-95℃条件下搅拌6h-24h(优选为70℃条件下搅拌12h)，得到胶体溶液，过滤(可采用0.22μm的ptfe滤膜)后复溶(加水复溶)，然后加入多壁碳纳米管，于70℃-95℃条件下搅拌12h-24h(优选于90℃条件下搅拌12h)，离心得到粉末，洗涤(依次用水和乙醇)后干燥，再于500℃-600℃条件下退火2h-8h(优选550℃条件下退火4h)，得到所述tio2@mwcnts(tio2与多壁碳纳米管的质量比为(0.1-1)：1)；将所述tio2@mwcnts分散于水中，加入氯乙酸混合，于60℃-95℃条件下搅拌1h-6h进行羧基化反应(优选95℃条件下搅拌2h进行羧基化反应；相对较高的温度更有利于羧基化的进行)，离心，得到所述羧基化的tio2@mwcnts。还可以再用去离子水洗涤，再加入agno3水溶液，检测agcl含量，再用去离子水洗涤直至无法检测到agcl为止，10000r pm离心15min，得到沉淀物于60℃条件下干燥24h。

9、其中，钛酸四丁酯与硝酸的体积比为(5-20)ml：1ml(优选为10ml：1ml)。过滤后复溶得到的胶体溶液的浓度为1mg/ml-10mg/ml(优选为2mg/ml)，过滤后复溶得到的胶体溶液与多壁碳纳米管的比例为100ml：(100-1000)mg(优选为100ml：200m g)。所述tio2@mwcnts与氯乙酸的比例为1g：(2-30)ml(优选为1g：10ml)。

10、通过控制氯乙酸的添加量，可以制备不同羧化程度的tio2@mwcnts(可通过酸碱滴定法测定羧基化tio2@mwcnts表面羧酸基团的数量)，从而控制最终产物的电负性。

11、在一些优选的实施情况中，上述固相分散萃取包括以下步骤：将所述去除蛋白质后的血浆样本与所述复合材料混合，涡旋0.5min-3min，在4℃-25℃和12000rpm-15000rpm的条件下离心5min-10min(优选涡旋2min，在4℃和14000rpm的条件下离心10min)。

12、在一些优选的实施情况中，上述去除蛋白质后的血浆样本的制备方法包括以下步骤：将血浆样本与乙腈按照体积比1:(3-5)混合，涡旋0.5min-3min，在4℃-25℃和12000rpm-15000rpm的条件下离心5min-10min(优选涡旋1min，在4℃和14000rpm的条件下离心10min)，得到的上清液即为所述去除蛋白质后的血浆样本。

13、本专利技术的第二方本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测血浆中药物的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：将去除蛋白质后的血浆样本与复合材料混合进行固相分散萃取，得到上清液；

2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述小分子药物为氨磺必利。

3.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述复合材料的制备方法包括以下步骤：将钛酸四丁酯与硝酸在水溶液体系中于70℃-95℃条件下搅拌6h-24h，得到胶体溶液，过滤后复溶，然后加入多壁碳纳米管，于70℃-95℃条件下搅拌12h-24h，离心得到粉末，洗涤后干燥，再于500℃-600℃条件下退火2h-8h，得到所述TiO2@MWCNTs；将所述TiO2@MWCNTs分散于水中，加入氯乙酸混合，于60℃-95℃条件下搅拌1h-6h进行羧基化反应，离心，得到所述羧基化的TiO2@MWCNTs。

4.根据权利要求3所述的前处理方法，其特征在于，钛酸四丁酯与硝酸的体积比为(5-20)mL：1mL。

5.根据权利要求3所述的前处理方法，其特征在于，过滤后复溶得到的胶体溶液的浓度为1mg/mL-10mg/mL，过滤后复溶得到的胶体溶

6.根据权利要求3所述的前处理方法，其特征在于，所述TiO2@MWCNTs与氯乙酸的比例为1g：(2-30)mL。

7.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述固相分散萃取包括以下步骤：将所述去除蛋白质后的血浆样本与所述复合材料混合，涡旋0.5min-3min，在4℃-25℃和12000rpm-15000rpm的条件下离心5min-10min。

8.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述去除蛋白质后的血浆样本的制备方法包括以下步骤：将血浆样本与乙腈按照体积比1:(3-5)混合，涡旋0.5min-3min，在4℃-25℃和12000rpm-15000rpm的条件下离心5min-10min，得到的上清液即为所述去除蛋白质后的血浆样本。

9.一种血浆中药物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1至8任一项所述的前处理方法处理得到的所述上清液作为进样样本，采用LC-MS/MS对所述进样样本进行检测；所述药物为二甲双胍、阿立哌唑或氨磺必利。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，采用C18色谱柱进行色谱分离，含2mM甲酸铵和质量浓度为0.0012％甲酸的超纯水为流动相A，乙腈为流动相B。

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【技术特征摘要】

1.一种检测血浆中药物的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：将去除蛋白质后的血浆样本与复合材料混合进行固相分散萃取，得到上清液；

2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述小分子药物为氨磺必利。

3.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述复合材料的制备方法包括以下步骤：将钛酸四丁酯与硝酸在水溶液体系中于70℃-95℃条件下搅拌6h-24h，得到胶体溶液，过滤后复溶，然后加入多壁碳纳米管，于70℃-95℃条件下搅拌12h-24h，离心得到粉末，洗涤后干燥，再于500℃-600℃条件下退火2h-8h，得到所述tio2@mwcnts；将所述tio2@mwcnts分散于水中，加入氯乙酸混合，于60℃-95℃条件下搅拌1h-6h进行羧基化反应，离心，得到所述羧基化的tio2@mwcnts。

4.根据权利要求3所述的前处理方法，其特征在于，钛酸四丁酯与硝酸的体积比为(5-20)ml：1ml。

5.根据权利要求3所述的前处理方法，其特征在于，过滤后复溶得到的胶体溶液的浓度为1mg/ml-10mg/ml，过滤后复溶得到的胶体溶液与多壁碳纳米管的比例为100ml：(100-1000)mg。

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【专利技术属性】
技术研发人员：曾位位，钟国平，霍舒颜，黄民，邢云惠，
申请(专利权)人：深圳市龙岗区第二人民医院，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载我是这个专利的主人