M-MLV逆转录酶突变体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种M‑MLV逆转录酶突变体及其制备方法和应用。本发明专利技术提供了一种M‑MLV逆转录酶突变体及其制备方法和应用。所述M‑MLV逆转录酶突变体融合了多个突变变体的结构特点，其在逆转录活性和热稳定性方面均具有较好的表现。尤其是氨基酸序列如SEQ ID NO.01所示的M‑MLV逆转录酶突变体Super RT，其具有较高的持续合成能力，可对长链RNA模板进行良好的逆转录反应；且抗抑制能力强，可确保在复杂的反应环境中进行cDNA的合成，即使在常见的抑制剂如胍盐、肝素和盐存在的情况下，也可以在较短的时间内完成全长cDNA的合成。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体涉及一种m-mlv逆转录酶突变体及其制备方法和应用。

技术介绍

1、逆转录酶的发现证明了遗传信息并不是单向地从dna到rna再到蛋白质，其也可能以相反的方向从rna传递给dna。将成熟mrna逆转录合成cdna的能力对于在各种生物医学环境中获取信息至关重要，包括诊断、预后、生物技术和法医生物学等。因此，逆转录酶成为了分子生物学中无处不在的工具。

2、逆转录酶最初在moloney小鼠白血病病毒(mmlv)中被发现，是一种以rna为模板的dna聚合酶，由671个氨基酸组成，由四个亚结构域（手指域、手掌域、拇指域和连接域）和核糖核酸酶h（rnase h）活性结构域组成，具有rnase h活性，不具有3’-5’外切酶活性，可用于逆转录合成cdna。在逆转录合成cdna过程中的主要挑战之一是rna二级结构的干扰，虽然较高的反应温度可以去除模板rna的二级结构，但过高的温度通常会导致野生型(wt) mmlv逆转录活性急剧降低。逆转录酶的活性还受其他多种因素的影响，如反应体系中存在抑制剂(如细胞裂解物和相关试剂)时，如较低容量的反应体本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.M-MLV逆转录酶突变体，其特征在于，与野生型M-MLV逆转录酶的氨基酸序列相比，所述逆转录酶突变体的氨基酸序列具有如下突变中的一种或多种：Y133K、T306H、T330G、L435R。

2.根据权利要求1所述M-MLV逆转录酶突变体，其特征在于，与野生型M-MLV逆转录酶的氨基酸序列相比，所述逆转录酶突变体的氨基酸序列具有如下突变组合中的一种：

3.根据权利要求1或2所述M-MLV逆转录酶突变体，其特征在于，所述野生型M-MLV逆转录酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.02所示。

4.根据权利要求3所述M-MLV逆转录酶突变体，其特征在于，所述...

【技术特征摘要】

1.m-mlv逆转录酶突变体，其特征在于，与野生型m-mlv逆转录酶的氨基酸序列相比，所述逆转录酶突变体的氨基酸序列具有如下突变中的一种或多种：y133k、t306h、t330g、l435r。

2.根据权利要求1所述m-mlv逆转录酶突变体，其特征在于，与野生型m-mlv逆转录酶的氨基酸序列相比，所述逆转录酶突变体的氨基酸序列具有如下突变组合中的一种：

3.根据权利要求1或2所述m-mlv逆转录酶突变体，其特征在于，所述野生型m-mlv逆转录酶的氨基酸序列如seq id no.02所示。

4.根据权利要求3所述m-mlv逆转录酶突变体，其特征在于，所述m-mlv逆转录酶突变体的氨基酸序列如seq id no.01所示。

5.编码基因，其特征在于，所述编码基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑洪坤，刘敏，张梦龙，
申请(专利权)人：青岛百创智能制造技术有限公司，
类型：发明
国别省市：