光稳定的体内染色组合物及其制备方法技术

通过淬灭三重态的染料分子，使其返回到无活性的基态，从而减少噻嗪染料溶液的光化学脱甲基化反应，在该反应中，所述染料分子同时作为感光剂和底物。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及光稳定的噻嗪染料生物染色组合物，例如，本申请人的美国专利第6,086,852号公开的氯化甲苯胺蓝(“TC”)染料组合物。另一方面，本专利技术还涉及这些组合物的制备方法。本专利技术特别涉及光稳定的氯化甲苯胺蓝(“TC”)染料组合物及其制备方法。
技术介绍
据报道，过去的工作者如Mashberg(美国专利4,321,251)提出将TC用于体内异常结构的识别，他采用了现有技术中的染料产品，在该染料产品中，TC的构象异构体与该构象异构体的N-脱甲基化和N，N-脱甲基化衍生物之和少于80％，而且在该染料产品中，所述构象异构体的这两种N-脱甲基化衍生物超过了该染料组合物的约20％％。因此，以前的工作者并不知道他们的“TC”产品的确切组成，现有“TC”产品的制造商也无法重复制备这些产品。实际上，文献中普遍将TC的性质简单地称为它有“良好的色值”。生物染色剂委员会(Biological Stain Commission)指定了一种仅用于确定TC物质的“有机染料含量”的分析性滴定方法。现有技术中采用这种被笼统地称作“TC”的物质，导致了临床观察不能正常进行，而且在对这种用于人体诊断的产品的制售进行必要的规范时也存在严重的问题。除了初始组成不确定的问题之外，现有TC和其他噻嗪生物染色剂的组成还会随时间而变化。例如，Dean等在《染色技术(StainsTechnology)》第32卷第1期第35页等(1977)中建议，应将甲醇溶液中的噻嗪染料冷冻，以防止进一步发生氧化性的N-脱甲基化。Liao等在《染色技术》第57卷第1期第23页等(1982)中报道，通过同时加入盐酸二乙胺和盐酸二甲胺，可以显著抑制甲醇性的赖特白细胞染色剂(Wright′s stain)溶液中的亚甲蓝含量因沉淀而减少。在本申请人的美国专利第6,086,852中，介绍了一种可重复制备高品质TC产品的方法，相对于构象异构体的N-脱甲基化产物，这些TC产品最初具有高比例的构象异构体。尽管不接触空气且避开高温可阻碍构象异构体的氧化性N-脱甲基化，但是可以看到，在没有自由基清除剂如金属离子的情况下，这种TC产品的醇溶液会经历光引发的或光化学的N-脱甲基化。
技术实现思路
现在，专利技术人发现了改进噻嗪染料溶液的方法，其中，该染料分子同时作为光化学氧化性N-脱甲基化反应的感光剂和底物，在这类反应中，部分所述染料分子吸收光转变成单重态，部分所述单重态染料分子与未活化的底物染料分子反应，通过系统间过渡形成三重态分子，部分所述三重态分子与周围环境中的基态氧反应生成单重态氧分子，以及部分所述单重态氧分子使基态染料分子脱甲基化。本专利技术的改进方法大大减少了所述脱甲基化反应，该方法包括优选通过向所述溶液中加入自由基清除剂，例如金属离子，从而使至少部分三重态染料淬灭，于是使三重态染料分子返回到无活性的基态。具体实施例方式据猜测，噻嗪染料的氧化性N-脱甲基化反应的过程如下，以TC的脱甲基化为例 在步骤A和B中，TC失去电子产生阳离子基团，接着该基团再次被氧化，失去一个质子成为亚铵根离子。随后，该亚铵根离子受到水的亲核进攻(步骤C)生成甲醇胺中间体，该甲醇胺中间体中有一个羟基和一个氨基连接到同一个碳原子上。甲醇胺不稳定，胺的失去(步骤D)释放出甲醛和单脱甲基化的TC。亚甲蓝的脱甲基化相当于从天蓝A(Azure A)形成天蓝C(Azure C)。在光化学脱甲基化反应中，显然TC既是光化学反应的感光剂，又是底物，即在没有自由基清除剂的情况下，它自身可发生光解。这样，TC吸收光而成为“光敏剂”，使单激发态的TC和另一个TC分子的“底物”发生直接反应。该底物分子和经系统间过渡(isc)形成的染料的三重态发生反应。基态氧与染料的三重态反应生成单重态氧，接着单重态氧和底物发生反应。 在金属离子例如锌、钠等的“重原子”的作用下，染料的三重态淬灭而返回到无活性的基态单重态，从而防止了三重态参与降解反应。对于达到高的光化学稳定性所需金属离子的数量不是很苛刻，参照本公开采用常规实验就可确定该数量。虽然该数量更大时无害处，更小时也至少会有部分作用，但大体而言，染料溶液中优选含有大于约4重量％的锌和/或9重量％的钠。为达到至少部分的有效性，金属成分的最小值应取大于2重量％。实施例下面的例子解释了本专利技术优选方案的实施，但这并不意味着限制了本专利技术的范围，本专利技术的范围仅在所附的权利要求中作了规定。实施例1这个实施例解释了含有很少量金属离子的TC产品的光不稳定性。根据本申请人的美国专利6,086,852(此以参考的方式引用该专利)中的实施例1制备TC产品的样品，然后用制备高效液相色谱法进一步纯化。该样品总的金属含量小于0.2重量％。试样量的这种纯化后的TC产物的样品是深蓝色的。试验室静置过夜后，在白炽灯环境下暴露，该溶液变成无色。实施例2采用实施例1中的样品，不同之处在于，在溶液中含有大约4重量％的锌(以氯化锌形式)和9％的钠(以氯化钠形式)，该样品在白炽灯环境下实际上是绝对稳定的。实施例3用亚甲蓝、天蓝A和天蓝C代替TC重复实施例1和2的过程，可得到类似结果。实施例4重复实施例1-3的过程，不同之处在于在溶液中仅采用氯化锌以及在溶液中仅采用氯化钠。得到了相同的结果。实施例5重复实施例1-4的过程，不同之处在于没有采用锌盐和钠盐，而是采用了镁、铬和硅的可溶性盐得到了类似的结果。为了使本领域的技术人员理解并实施这项专利技术，申请人就以上方面描述了本专利技术，并提供了目前优选的实施方式。权利要求1.显著减少溶液中噻嗪染料的脱甲基化反应的方法，其中，该染料的分子同时作为光化学氧化性脱甲基化反应的感光剂和底物，在这类反应中，部分所述染料分子吸收光转变成单重态，部分所述单重态染料分子与未活化的底物染料分子反应，通过系统间过渡形成三重态分子，部分所述三重态分子与周围环境中的基态氧反应生成单重态氧分子，以及部分所述单重态氧分子使基态染料分子脱甲基化，所述方法包括淬灭部分所述三重态染料分子，使其返回到无活性的基态。2.如权利要求1所述的方法，其中三重态的淬灭是由向所述溶液中加入金属离子所致。3.如权利要求2所述的方法，其中所述金属离子是锌离子。4.如权利要求2所述的方法，其中所述金属离子是钠离子。5.如权利要求1所述的方法，其中所述金属离子同时为锌离子和钠离子。全文摘要通过淬灭三重态的染料分子，使其返回到无活性的基态，从而减少噻嗪染料溶液的光化学脱甲基化反应，在该反应中，所述染料分子同时作为感光剂和底物。文档编号C07D279/18GK1545425SQ01823584 公开日2004年11月10日 申请日期2001年8月28日 优先权日2001年8月28日专利技术者道格拉斯·D·伯克特, 道格拉斯 D 伯克特 申请人:日拉生物技术公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
显著减少溶液中噻嗪染料的脱甲基化反应的方法，其中，该染料的分子同时作为光化学氧化性脱甲基化反应的感光剂和底物，在这类反应中，　　　　部分所述染料分子吸收光转变成单重态，　　　　部分所述单重态染料分子与未活化的底物染料分子反应，通过系统间过渡形成三重态分子，　　　　部分所述三重态分子与周围环境中的基态氧反应生成单重态氧分子，以及　　　　部分所述单重态氧分子使基态染料分子脱甲基化，　　　　所述方法包括淬灭部分所述三重态染料分子，使其返回到无活性的基态。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：道格拉斯D伯克特，
申请(专利权)人：日拉生物技术公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]