【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及表征5’加帽核糖核酸的领域。
技术介绍
1、核糖核酸或rna是所有生命的核心组成部分。在真核生物中，rna聚合酶将细胞核中的dna转录为rna。这些rna从产生到降解都受到广泛的调控。这种调控不仅受到这些rna的核苷酸序列和启动子的指导，而且还受到附接在rna上的转录后和共转录修饰的指导。在真核生物中，5’帽为最常见的修饰之一。
2、包括信使rna(mrna)在内的几种rna都带有5’帽。mrna帽为5’端修饰，通常以共转录方式附接在真核生物中rna聚合酶ii(pol-ii)转录的转录本上。当转录的前mrna长度为20至30个核苷酸时，一系列酶促反应将倒位的甲基化鸟苷(m7g)通过5’-5’三磷酸桥添加到新生rna的5’端。这个末端倒位的m7g碱基称为cap0(也表示为m7gpppn1pn2p-rna，其中n1和n2分别为前mrna的第一和第二转录核苷酸，p表示它们之间的磷酸基团)。
3、除了末端m7g外，rna帽还可含有其他修饰，其中最常见的是对第一和/或第二转录碱基的2’-o甲基化或nm修饰。这...
【技术保护点】
1.一种利用测序表征加帽核糖核酸(RNA)的方法，其中所述加帽RNA是带有天然5’帽的核糖核酸(RNA)，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法在步骤i)和ii)之间还包括对i)中形成的氧化邻二醇进行还原胺化的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述方法在步骤ii)和iii)之间还包括以下步骤：核苷酸材料沉淀、RNA纯化、多聚A去除和/或多聚A加尾。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述测序通过纳米孔测序进行。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述接头包含胺基
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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种利用测序表征加帽核糖核酸(rna)的方法，其中所述加帽rna是带有天然5’帽的核糖核酸(rna)，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法在步骤i)和ii)之间还包括对i)中形成的氧化邻二醇进行还原胺化的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述方法在步骤ii)和iii)之间还包括以下步骤：核苷酸材料沉淀、rna纯化、多聚a去除和/或多聚a加尾。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述测序通过纳米孔测序进行。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述接头包含胺基。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多核苷酸衔接子包含引入的氨基。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将iii)中生成的测序信息输入到序列信息分类器中，以表征所述加帽rna。
8.根据权利要求7所述的方法，其中将iii)中生成的测序信息输入到序列信息分类器中，以识别所述加帽rna的所述天然5’帽。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述邻二醇为2’,3’-二醇、1’,2’-二醇或3’,4’-二醇。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多核苷酸衔接子除了可以与所述rna的5’端连接外，还可以与所述rna的3’端连接。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中附接到所述多核苷酸衔接子上的测序马达蛋白与所述rna的5’端连接。
12.根据权利要求4至11中任一项所述的方法，其中纳米孔测序按3’至5’方向进行。
13.根据权利要求4至12中任一项所述的方法，其中所述方法包括通过延伸的rna构建体转位穿过纳米孔过程中产生的离子电流特征对其进行表征。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中可以通过单次测定对多核苷酸构...
【专利技术属性】
技术研发人员：E·D·瓦伦，A·M·尼亚兹，J·I·瓦雷比瓦，
申请(专利权)人：西部创新公司，
类型：发明
国别省市：
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