【技术实现步骤摘要】
本申请涉及免疫诊断，尤其涉及一种定量检测人总ige抗体的检测卡及制备方法、试剂盒和应用。
技术介绍
1、ige(immunoglobulin e，简称ige)即免疫球蛋白e，是一类仅存在于哺乳动物体内的一类抗体，正常人血清中含量最小的免疫球蛋白。免疫球蛋白e分子量为160kd，它的单体由两个重链和两个轻链组成。ige主要由呼吸道和消化道黏膜固有层的浆细胞产生，在正常人血清中浓度极低，约为5x10^-5mg/ml。ige的尾部与嗜碱细胞和肥大细胞具有高度亲和性，故又称为反应素或亲细胞抗体。当抗体与抗原结合后，嗜碱细胞与肥大细胞释放组织胺一类的物质促进炎症的发展。这也是引发速发型过敏反应的抗体。ige可引起i型变态反应(又称过敏)，同时可能与机体抗寄生虫免疫有关。寄生虫和过敏原入侵时，血清中的免疫球蛋白e的含量有明显的提升，过敏体质或超敏患者，血清中ige明显高于正常人。检测总ige、特别是ige型自身抗体有助于了解ige在自身免疫病中的作用、更全面地认识aid的病因及发病机制；提高aid的诊断能力、拓展临床诊治视野与水平、帮助研发靶向药物。市面上也不断地涌入大量的poct(point-of-care testing，即时检验)产品，而这些产品的性能普遍又达不到高敏的要求，比如检出率低、不能监测病情的发展趋势、灵敏度特异性不够等。因此，一种能够提高检出率，且能够随时监测患者血液中人总ige含量的检测方法和试剂盒，对基层医院或者病房尤其重要。
2、目前，人总ige常用的检测方法有放射免疫测定法、酶联免疫测定法等，这些方法都
技术实现思路
1、本申请的目的在于提出一种定量检测人总ige抗体的检测卡及制备方法、试剂盒和应用，以解决现有技术中人总ige抗体检测成本高，操作过程较繁琐，反应时间长、检测较慢的技术问题。
2、为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种定量检测人总ige抗体的检测卡，采用了如下所述的技术方案：
3、卡壳和试纸条，所述试纸条装于所述卡壳内；所述试纸条包括设置在底板上的样品垫、结合垫、反应膜以及吸收垫；
4、其中，所述结合垫上设置有镧系元素荧光微球标记的动物抗人ige单克隆抗体；所述反应膜上设置有包被动物抗人ige多克隆抗体的检测线和包被动物igg抗体的质控线。
5、进一步的，所述镧系元素选自eu3+、tb3+、sm3+和dy3+中的一种。
6、进一步的，所述镧系元素荧光微球的直径为290-350nm，固含量为1％。
7、进一步的，所述动物的种属包括兔、山羊、绵羊、鸡和鼠。
8、为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种定量检测人总ige抗体的检测卡的制备方法，采用了如下所述的技术方案：
9、分别制备样品垫、结合垫以及反应膜，其中，所述结合垫上设置有镧系元素荧光微球标记的动物抗人ige单克隆抗体；所述反应膜上设置有包被动物抗人ige多克隆抗体的检测线和包被动物igg抗体的质控线；
10、将所述反应膜设置在底板上，将所述结合垫的一端叠压在所述反应膜靠近检测线的一端上，将预先制备的吸收垫的一端叠压在所述反应膜靠近质控线的另一端上，并将所述样品垫的一端搭接在所述结合垫的另一端上，形成试纸条；
11、将所述试纸条安装至卡壳中，得到检测卡。
12、进一步的，所述样品垫通过以下制备步骤制得：
13、将预先配制的样品垫处理液涂布于玻璃纤维上，烘干处理，得到所述样品垫；
14、所述结合垫通过以下制备步骤制得：
15、使用镧系元素荧光微球对动物抗人ige单克隆抗体进行标记，得到荧光微球标记抗体溶液；
16、将所述荧光微球标记抗体溶液按照3.0-5.0μl/cm的喷量均匀喷涂于初始结合垫上；
17、将喷好的所述初始结合垫，放置于35～39℃、湿度≤30％的环境中里干燥16～24h，制得所述结合垫；以及
18、所述反应膜通过以下制备步骤制得：
19、使用包被稀释液将动物抗人ige多克隆抗体稀释至1.0-1.5mg/ml，得到t线包被工作液；
20、使用包被稀释液将动物igg抗体稀释至1.0-1.5mg/ml，得到c线包被工作液；
21、将所述t线包被工作液和所述c线包被工作液分别划膜于硝酸纤维素膜上，形成对应的检测线和质控线；
22、将划膜完成的硝酸纤维素膜，于45～55℃、湿度≤30％的环境中进行干燥，得到反应膜。
23、进一步的，所述荧光微球标记抗体溶液通过以下配制步骤制得：
24、取第一离心管，加入标记缓冲液，并将固含量为1％的镧系元素荧光微球涡旋混匀后加入标记缓冲液中，涡旋混匀；
25、将标记活化液加入第一离心管中，混匀；
26、混匀完成后，将第一离心管安置于旋转混匀仪上旋转反应；
27、待反应完成后，进行离心，并用标记缓冲液进行清洗后，再次进行离心；
28、离心结束后，取出第一离心管，吸取上清，留取沉淀，并加入标记缓冲液，超声将沉淀完全打散；
29、往第一离心管内加入动物抗人ige单克隆抗体，混匀后进行旋转反应；
30、旋转反应完成后，将标记封闭液加入至第一离心管中，旋转反应；
31、封闭完成后，进行离心；
32、离心结束后，弃上清，留取沉淀，并将标记保存液加入离心管中，用超声将沉淀完全打散；
33、沉淀打散均匀后，移入第二离心管中，吸取标记保存液清洗标记所用的第一离心管，清洗后将溶液移入第二离心管中，混匀，得到荧光微球标记抗体溶液，所述荧光微球标记抗体溶液在2～8℃保存备用。
34、进一步的，所述样品垫处理液中包括牛血清白蛋白、蔗糖、1wt％抗人红细胞抗体、0.1m硼酸硼砂缓冲液以及tween-20；
35、所述包被稀释液中包括蔗糖和0.05m ph8.0 tris缓冲液；
36、所述标记缓冲液中包括ph为6.0±0.05的mes缓冲液；
37、所述标记活化液中包括1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺；
38、所述标记封闭液中包括牛血清白蛋白；
39、所述标记保存液中包括牛血清白蛋白、蔗糖、酪蛋白钠盐、海藻糖、0.05mph8.0tris缓冲液以及proclin 300。
40、为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种定量检测人总ige抗体的试剂盒，采用了如下所述的技术方案：
41、所述试剂盒包括如上所述的定量检测人总ige抗体的检测卡或采用如上所述的制备方法制得的检测卡、样品稀释液以及芯片，所述芯片中包含有标准曲线数据。
【技术保护点】
1.一种定量检测人总IgE抗体的检测卡，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的定量检测人总IgE抗体的检测卡，其特征在于，所述镧系元素选自Eu3+、Tb3+、Sm3+和Dy3+中的一种。
3.根据权利要求1所述的定量检测人总IgE抗体的检测卡，其特征在于，所述镧系元素荧光微球的直径为290-350nm，固含量为1％。
4.根据权利要求1所述的定量检测人总IgE抗体的检测卡，其特征在于，所述动物的种属包括兔、山羊、绵羊、鸡和鼠。
5.一种定量检测人总IgE抗体的检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的定量检测人总IgE抗体的检测卡的制备方法，其特征在于，所述样品垫通过以下制备步骤制得：
7.根据权利要求6所述的定量检测人总IgE抗体的检测卡的制备方法，其特征在于，所述荧光微球标记抗体溶液通过以下配制步骤制得：
8.根据权利要求7所述的定量检测人总IgE抗体的检测卡的制备方法，其特征在于，所述样品垫处理液中包括牛血清白蛋白、蔗糖、1wt％抗人红细胞抗体、0.1M硼酸
9.一种定量检测人总IgE抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1至4中任一项所述的定量检测人总IgE抗体的检测卡或采用如权利要求5至8任一项所述的制备方法制得的检测卡、样品稀释液以及芯片，所述芯片中包含有标准曲线数据。
10.根据权利要求9所述的定量检测人总IgE抗体的试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒用于检测血清、血浆或全血样本中总IgE抗体的含量。
...【技术特征摘要】
1.一种定量检测人总ige抗体的检测卡，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的定量检测人总ige抗体的检测卡，其特征在于，所述镧系元素选自eu3+、tb3+、sm3+和dy3+中的一种。
3.根据权利要求1所述的定量检测人总ige抗体的检测卡，其特征在于，所述镧系元素荧光微球的直径为290-350nm，固含量为1％。
4.根据权利要求1所述的定量检测人总ige抗体的检测卡，其特征在于，所述动物的种属包括兔、山羊、绵羊、鸡和鼠。
5.一种定量检测人总ige抗体的检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的定量检测人总ige抗体的检测卡的制备方法，其特征在于，所述样品垫通过以下制备步骤制得：
7.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘秀华，蒋析文，齐文闯，刘双，孙雪梅，钟汉高，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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