表达带标签的PERK的细胞及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种构建表达带标签的PERK的细胞的方法，包括用Crispr/Cas9系统将编码标签的核酸敲入至PERK上的步骤。所述Crispr/Cas9系统包括向导RNA和修复结构，所述修复结构包括所述向导RNA靶向的区段和标签。本发明专利技术通过使用Crispr/Cas9系统将敲入HA标签敲入在U20S细胞系中，使PERK的C端带有血凝素标签。使用该细胞，我们可以通过观察内源性PERK行为来研究PERK相互作用、生理功能、药物筛选等，为研究PERK信号通路在神经退行性疾病、髓磷脂紊乱、肿瘤生长和癌症的病理生理学和疾病进展中起到重要作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于内质网疾病研究领域，具体涉及表达带标签的perk的细胞及其构建方法和应用。

技术介绍

1、在内质网应激诱导未折叠蛋白反应(upr)中，由eif2ak3编码的蛋白激酶rna样内质网激酶(perk)充当关键调节因子。一系列细胞应激条件可能会引发内质网(er)平衡的破坏并导致er应激反应，进一步激活未折叠蛋白反应(upr)分支。这导致随后蛋白激酶rna样内质网激酶(perk)磷酸化并激活真核起始因子2α(eif2α)的磷酸化，并快速下调细胞内蛋白质合成和基因翻译。疾病特异性错误/未折叠蛋白的积累和聚集与多种神经退行性疾病相关，包括多发性硬化症(ms)、阿尔茨海默病(ad)、帕金森病(pd)、肌萎缩侧索硬化症(als)、亨廷顿病(hd)和癌症。

2、此外，upr的长期激活可能会通过启动细胞凋亡而引起矛盾的反应。多项证据表明perk/eif2α/atf4/chop在肿瘤进展中发挥着关键作用。

3、为了研究perk信号通路的生理和病理功能，以及在perk相关疾病中的药物筛选，需要构建表达带标签的perk的细胞。

<本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种构建表达带标签的PERK的细胞的方法，其特征在于，包括用Crispr/Cas9系统将编码标签的核酸敲入至PERK上的步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Crispr/Cas9系统包括向导RNA和修复结构，所述修复结构包括所述向导RNA靶向的区段和标签。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述向导RNA的序列选自SEQ ID NO:1-3。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述向导RNA靶向的区段的核酸序列如SEQID NO:10所示。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述标签为血凝素标签...

【技术特征摘要】

1.一种构建表达带标签的perk的细胞的方法，其特征在于，包括用crispr/cas9系统将编码标签的核酸敲入至perk上的步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述crispr/cas9系统包括向导rna和修复结构，所述修复结构包括所述向导rna靶向的区段和标签。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述向导rna的序列选自seq id no:1-3。

4.根据权利要求2所述的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：高飞，陈思宇，陈剑清，
申请(专利权)人：浙江理工大学绍兴生物医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：