一种复杂样本中的γ-H2AX的LC-MS/MS定量分析方法技术

本发明专利技术公开了一种复杂样本中的γ‑H2AX的LC‑MS/MS定量分析方法，它包括如下步骤：(1)配制标准曲线工作溶液；(2)配制内标工作溶液；(3)配制标准曲线样品；(4)配制含内标的标准曲线样品；(5)待测样品处理；(6)待测样品溶液、含内标的标准曲线样品溶液进行LC‑MS/MS分析；(7)根据内标‑标准曲线法对待测样品中H2AX、γ‑H2AX含量进行定量分析；(8)评估组织样本里磷酸化标志物的DNA损伤值。本发明专利技术解决了尚没有准确的复杂样本中的γ‑H2AX的定量分析方法这一技术难题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种复杂样本中的γ-h2ax的lc-ms/ms定量分析方法，属于药物分析。

技术介绍

1、随着环境中有毒化学物质、空气、水及食品污染等，基因毒性物质无处不在，其通过与dna直接或间接作用而引起dna损伤或染色体畸变，具有诱发癌症、畸形等重大疾病的潜在威胁。当dna发生双链断裂会激活dna损伤应答机制，h2ax的139位丝氨酸残基迅速被磷酸化，形成γ-h2ax，可作为dna损伤的生物标志物[1]。

2、本课题组前期基于细胞样本建立了针对γ-h2ax的液相色谱串联质谱方法，实现对其的准确定量检测，并将其应用于欧洲替代方法验证中心(ecvam)推荐的一组69种模型化合物，动态监测基因毒性化合物影响dna损伤/修复及转录的全过程，定量揭示基因毒性和致癌风险等级[2]。

3、然而由于复杂生物样品中磷酸化肽含量很低，且受高丰度非修饰肽的信号抑制，使用适用于细胞样本的提取方法无法检测到体内的痕量γ-h2ax，复杂生物医学样本的γ-h2ax检测面临挑战[3]。

4、γ-h2ax属于磷酸化肽，目前很多关于磷酸化肽的检测方法包本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种复杂组织样本中的γ-H2AX的LC-MS/MS定量分析方法，所述的方法包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，LC-MS/MS分析过程中，所述H2AX的母离子m/z为442，子离子m/z为182和136；所述γ-H2AX的母离子m/z为482，子离子m/z为433和182。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法H2AX和γ-H2AX的线性范围均为1-250ng/mL。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法H2AX和γ-H2AX的最低定量限均为1ng/mL。

【技术特征摘要】

1.一种复杂组织样本中的γ-h2ax的lc-ms/ms定量分析方法，所述的方法包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，lc-ms/ms分析过程中，所述h2ax的母离子m/z为442，子离子m/z为182和136；所述γ-h2ax的母离子m/z为...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐华，李治，谢剑炜，赵晓童，陈佳，马波，聂志勇，王朝霞，高鹏霞，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：