一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对CAG细胞模型的干预应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医学研究技术领域，提供一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对CAG细胞模型的干预应用，包括以下步骤：步骤一、将细胞种子在37℃水浴锅中快速解冻后，滴加入无菌PBS缓冲液中，混匀后离心，弃去上清，加入完全培养基，孵育过夜；步骤二、每3天传代一次，传代比率为1：3，使用0.25％胰酶消化后，终止消化，离心，弃去上清，加入完全培养基，孵育过夜；步骤三、在完全培养基中添加MNNG试剂，培养至第四代，使用RT‑PCR检测验证造模条件。利用白木香叶具有显著的抗炎活性，其抗炎物质基础可能是正丁醇萃取部位中的4个二苯甲酮类化合物，上述活性成分可能通过对RTK/P I 3K‑Akt/Bc l‑2信号轴的调控，影响组织细胞凋亡，从而发挥抗CAG的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学研究，具体为一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对cag细胞模型的干预应用。

技术介绍

1、慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,cag)是一种以胃黏膜上皮和腺体萎缩，数目减少，胃黏膜变薄，黏膜基层增厚，或伴幽门腺化生和肠腺化生，或有黏膜上皮化生或异型增生为特征的慢性消化系统疾病。病变主要位于胃窦部和胃体部，常表现为上腹部隐痛、胀满、嗳气，食欲不振，或消瘦、贫血等，无特异性。cag是肠型胃癌发展过程中重要的起始阶段，是一种多致病因素性疾病及癌前病变。此病多见于中年以上，并有明显的地区差异。据全国cag患者就诊数据统计，约有7.62％的患者因cag而最终演变成胃癌，43.23％的患者均存在不同程度的黏膜上皮异型增生。

2、当前临床对于感染hp导致的慢性胃炎一般采用经典的四联疗法作为临床对症治疗。但该疗法仅能做到临床对症治疗，对于cag导致的黏膜上皮化生等一系列继发症状却难以逆转。此外，药物本身的毒副作用同样不可忽视。研究结果表明，hp感染者长期服用ppi可使胃炎类型发生改变，从胃窦为主胃炎发展为本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对CAG细胞模型的干预应用，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对CAG细胞模型的干预应用，其特征在于，所述步骤一中的种子细胞以干冰冻存形式寄送，且无菌PBS缓冲液取用10mL，其中存放种子细胞的冻存管于37℃水浴锅中快速解冻后，在无菌PBS缓冲液中滴加细胞悬液后缓慢吹打混匀，并在1000rpm转速条件下离心5min，弃去上清，加入5mL完全培养基，吹打混匀后将细胞悬液加入T25细胞培养瓶中，十字震荡使细胞均匀铺展在培养瓶内，并放在培养箱中孵育过夜，所述培养基为90％h-DMEM+10％胎...

【技术特征摘要】

1.一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对cag细胞模型的干预应用，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对cag细胞模型的干预应用，其特征在于，所述步骤一中的种子细胞以干冰冻存形式寄送，且无菌pbs缓冲液取用10ml，其中存放种子细胞的冻存管于37℃水浴锅中快速解冻后，在无菌pbs缓冲液中滴加细胞悬液后缓慢吹打混匀，并在1000rpm转速条件下离心5min，弃去上清，加入5ml完全培养基，吹打混匀后将细胞悬液加入t25细胞培养瓶中，十字震荡使细胞均匀铺展在培养瓶内，并放在培养箱中孵育过夜，所述培养基为90％h-dmem+10％胎牛血清，所述培养箱的条件为37℃、5％co2和95％rh。

3.根据权利要求1所述的一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对cag细胞模型的干预应用，其特征在于，所述步骤二中在确认细胞状态后，在超净工作台内弃去培养基，加入3mlpbs清洗细胞后吸弃，加入1ml0.25％胰酶消化2min，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入2ml完全培养基终止消化。1000rpm转速条件下离心5min，弃去上清，加入完全培养基，吹打混匀后将细胞悬液加入t25细胞培养瓶或100mm的细胞培养皿中，十字震荡使细胞均匀铺展在培养瓶内，并放在培养箱中孵育过夜，所述培养基为90％h-dmem+10％胎牛血清，所述培养箱的条件为37℃、5％co2和95％rh。

4.根据权利要求1所述的一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对cag细胞模型的干预应用，其特征在于，所述步骤四中接种细胞采用1e4个/孔的密度1.细胞接种，并在培养箱中孵育过夜，并设置溶剂对照组和8个浓度梯度的样品组。每个浓度梯度下设置3个重复孔，待96孔板中细胞铺板率达到40％～60％时进行给药，给药完成后将96孔板放置在培养箱中培养24h后弃掉上清，加入0.5mg/ml的mtt工作液在37℃避光孵育4h，待孵育结束后弃掉上清，每孔加150μldmso，在490nm处读取od值，根据公式计算细胞相对活力计算，所述培养箱的条件为37℃、5％co2和95％rh，所述溶剂对照组每孔加入200μl完全培养液；样品组每孔加入200μl含有相应浓度受试物的完全培养液；调零孔无细胞接种，仅加入200μl完全培养液。

5.根据权利要求4所述的一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对cag细胞模型的干预应用，其特征在于，所述细胞相对活力的计算公式为：

6.根据权利要求1所述的一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对cag细胞模型的干预应用，其特征在于，所述步骤五—步骤八中的接种细胞为2e5个/孔的密度在6孔板中铺板率达到40％～50％时，进行分组给药，每孔给药量为2ml，每组设3个复孔，在培养箱中继续培养24h。

7.根据权利要求6所述的一种具备二苯甲酮类母核结构的化合物对cag细胞模型的干预应用，其特征在于，所述pcr检测中的培养箱培养24h吸弃培养液，1ml/孔pbs清洗两次，每孔加入1mltotalrnaextractor(trizol)，吹打裂解细胞后，收样保存于-80℃冰...

【专利技术属性】
技术研发人员：张炜华，王夏茵，孙丹，岳宝森，杨帅，职媛，吕楠，吴筱菁，
申请(专利权)人：西安市中医医院，
类型：发明
国别省市：