一种基于抗体偶联DNA纳米团簇探针的RNA m6A修饰单细胞多模态分析方法技术

本发明专利技术提供了一种基于抗体偶联DNA纳米团簇探针的RNA m<supgt;6</supgt;A修饰单细胞多模态分析方法，可实现m<supgt;6</supgt;A修饰的荧光成像、质谱定量以及同步辐射高分辨成像，获取有关m<supgt;6</supgt;A修饰的单细胞、空间定位和定量等多维度信息。本方法在m<supgt;6</supgt;A抗体的Fc区域特异性添加叠氮基团，最大限度减少抗原结合位点的破坏，并通过点击化学反应偶联金属纳米团簇。利用金属纳米团簇的荧光性质实现对m<supgt;6</supgt;A修饰的荧光原位成像；利用探针中的银元素，耦合激光剥蚀电感耦合等离子体质谱仪(LA‑ICP‑MS)实现单细胞定量；以及结合同步辐射X射线进行高分辨同步辐射成像。本发明专利技术具有特异性高、单细胞分辨、高空间分辨以及多尺度解析等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及核酸检测领域，具体为一种基于抗体偶联dna纳米团簇探针的rna m6a修饰单细胞多模态分析方法。

技术介绍

1、m6a(n6-甲基腺苷)修饰作为真核生物mrna最常见的一种转录后修饰，可在细胞层面影响多种生物学进程。

2、目前最常用的基于高通量测序的技术，如merip-seq和m6a-seq技术它们能够在转录组水平分析rna上的m6a修饰，虽然可以提供rna的甲基化水平信息，但是不能获得单细胞和空间位置信息，还存在成本高，需要输入大量样本，定量不够准确等问题；后来发展了依赖酶辅助识别的pcr定量技术，如t3 ligase-pcr和select技术，可以实现特定位点甲基化的精准定量；但是这些技术大多限制在群体细胞水平，忽略了细胞间变异性和具有生物学意义的稀有细胞群的分析，并丢失了空间定位信息。现有发展的依靠纳米孔阵列和高通量测序的m6a rna成像技术，可以实现单分子单细胞水平定量分析，但是难以进行原位分析不能获得空间位置信息；目前发展的m6a原位成像技术还很有限，像mr-fish是一种利用原位杂交技术检测单细胞中rrna甲基化的技本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于抗体偶联DNA纳米团簇探针的RNAm6A修饰单细胞多模态分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于抗体偶联DNA纳米团簇探针的RNAm6A修饰单细胞多模态分析方法，其特征在于，发卡DNA序列(5’-3’)为：TATCCGTCCTCCTTCCTCCACGGATAAATAAATAAATAAATAAATAA(47nt)；NH2-DNA序列为：NH2-CAAATAGTCATTATTTATTTATTTATTTATTT(32nt)。

3.根据权利要求1所述的基于抗体偶联DNA纳米团簇探针的RNAm6A修饰单细胞多模态分析方法，其特征在于，步...

【技术特征摘要】

1.一种基于抗体偶联dna纳米团簇探针的rnam6a修饰单细胞多模态分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于抗体偶联dna纳米团簇探针的rnam6a修饰单细胞多模态分析方法，其特征在于，发卡dna序列(5’-3’)为：tatccgtcctccttcctccacggataaataaataaataaataaataa(47nt)；nh2-dna序列为：nh2-caaatagtcattatttatttatttatttattt(32nt)。

3.根据权利要求1所述的基于抗体偶联dna纳米团簇探针的rnam6a修饰单细胞多模态分析方法，其特征在于，步骤(1)中，所述银纳米团簇的合成过程为：将368μl25μm的发卡dna溶液与100μl150μm的硝酸银溶液混合均匀，搅拌4min，然后在混合溶液中加入110μl50μm的硼氢化钠溶液，在4℃下搅拌6h还原硝酸银，得到银纳米团簇。

4.根据权利要求1所述的基于抗体偶联dna纳米团簇探针的rnam6a修饰单细胞多模态分析方法，其特征在于，步骤(2)中，所述单克隆抗体为fc区域特异性添加叠氮基团的m6a单克隆抗体。

5.根据权利要求1所述的基于抗体偶联dna纳米团簇探针的rnam6a修饰单细胞多模态分析方法，其特征在于，步骤(2)中，所述点击化学反应条件为：加入1mg/ml单克隆抗体溶液8μl、25mm alk-peg-nhs溶液20μl、1mm cuso4溶液10μl、5mm抗坏血酸钠溶液10μl、2mm bttaa溶液5μl,在氮气环境下，40℃搅拌过夜。

6.根据权利要求1所述的基于抗体偶联dna纳米团簇探针的rnam6a修饰单细胞多模态分析方法，其特征在于，步骤(3)中，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：任晓君，吴一凡，高学云，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：