可控合成单链DNA的末端脱氧核苷酸转移酶突变体及应用制造技术

本发明专利技术公开了可控合成单链DNA的末端脱氧核苷酸转移酶突变体及应用。本发明专利技术基于来源于白喉麻雀Zonotrichia albicollis的野生型末端脱氧核苷酸转移酶，通过筛选末端脱氧核苷酸转移酶的突变体类型，成功获得了多种突变体，这些突变体具备催化烯丙基或硝基苄基保护的核苷酸单体进行单个碱基聚合的能力，能够在不依赖模板的条件下，实现高效可控的单链DNA分子的合成，为DNA合成领域的研究与应用提供了新的可能性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及dna合成，具体涉及可控合成单链dna的末端脱氧核苷酸转移酶突变体及应用。

技术介绍

1、dna的酶法合成，因其独特的优势——高保真度、长片段合成能力以及低成本特性，已然成为当前dna合成
的核心发展趋势。然而，该技术的进一步发展却遭遇了一大瓶颈，即缺乏一种能够逐步添加核苷酸的dna聚合酶。这一缺失极大地限制了该技术的深入应用与拓展。

2、近年来，末端脱氧核苷酸转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase，tdt)凭借其无模板依赖性的特性，在dna的功能化改造中展现出了广泛的应用前景。作为一种dna聚合酶，tdt表现出了一定的底物适应性，这为dna酶法合成的未来发展提供了新的可能性与思路。目前，核苷酸连续聚合的控制主要通过三种方式实现：利用tdt与核苷酸的复合物、借助三磷酸腺苷双膦酸酶，以及采用可逆终止子技术。前两种方法虽有一定效果，但均无法确保严格的单碱基添加。相比之下，可逆终止子技术以其灵活性和广泛应用性脱颖而出，成为当前最为流行的控制手段。

3、可逆终止子，是一类3’端本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种末端脱氧核苷酸转移酶突变体，其特征在于，所述末端脱氧核苷酸转移酶突变体包括选自第121位、第136位、第237位、第258位、第337位、第338位、第447位、第457位、第461位、第464位、第468位的至少一个位置的突变位点，位置通过与SEQ ID No.2比对确定；所述末端脱氧核苷酸转移酶突变体与SEQ ID No.2或功能等同序列具有至少80％的同一性。

2.根据权利要求1所述末端脱氧核苷酸转移酶突变体，其特征在于，所述末端脱氧核苷酸转移酶突变体存在至少一个下述所示突变：

3.根据权利要求2所述末端脱氧核苷酸转移酶突变体，其特征在于，优选地，所...

【技术特征摘要】

1.一种末端脱氧核苷酸转移酶突变体，其特征在于，所述末端脱氧核苷酸转移酶突变体包括选自第121位、第136位、第237位、第258位、第337位、第338位、第447位、第457位、第461位、第464位、第468位的至少一个位置的突变位点，位置通过与seq id no.2比对确定；所述末端脱氧核苷酸转移酶突变体与seq id no.2或功能等同序列具有至少80％的同一性。

2.根据权利要求1所述末端脱氧核苷酸转移酶突变体，其特征在于，所述末端脱氧核苷酸转移酶突变体存在至少一个下述所示突变：

3.根据权利要求2所述末端脱氧核苷酸转移酶突变体，其特征在于，优选地，所述末端脱氧核苷酸转移酶突变体包含至少一个如下所示突变：v121k、m136t、n237k、g258a、k337a/l、n338k/e、p447a、r457a、r461a/q/k、r464a、a468t；所述3’端修饰的核苷酸优选为3’端保护的核苷酸；所述3’端保护的核苷酸的保护基团选自烯丙基...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏炜，隽叶雯，赵劲，颜莉，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：