一种南极磷虾荧光素酶突变体制造技术

本发明专利技术提供一种南极磷虾荧光素酶突变体，是氨基酸序列SEQ ID NO:1的南极磷虾荧光素酶的312位或348位发生了突变；其中312位的氨基由S突变为P，其中348位的氨基由E突变为K。本发明专利技术所提供的南极磷虾荧光素酶突变体AKL‑T具有更好的热稳定性，野生型AKL在45℃条件下10 min即完全丧失活性。然而本发明专利技术的突变体AKL‑T其催化活性分别保留了91%和82%。因此，本发明专利技术的南极磷虾荧光素酶突变体的保存和反应条件更宽松，更适合作为报告基因和用于微生物快速检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于功能蛋白酶，具体涉及一种南极磷虾荧光素酶突变体。

技术介绍

1、与传统的化学催化剂相比，生物酶因其特殊的优势，在工业领域发挥着越来越重要的作用。然而在工业生产环境下，大部分生物酶无法保持很高的活性。高稳定性的生物催化剂不仅能够在高温下催化反应，增加反应速率，更主要的是，高温能够降低微生物污染的风险，降低反应体系的黏度以及增加反应底物或者产物的溶解度。因此发展更加稳定的生物酶，使之更好的满足工业条件下的应用具有重要意义。

2、荧光素酶在氧气、atp与镁离子的参与下能发射荧光，在动物浅表组织成像等应用领域具有极好的应用价值。然而，荧光素酶的使用还存在诸多限制因素，包括atp和d-荧光素的较高 km值，野生型荧光素酶的热稳定性差等，这在很大程度上限制了它在工业中的应用。为了满足这些需求，科研工作者做出了巨大的努力来改善该酶的特性。特别是利用位点特异性突变和定向进化等基因修饰技术，确定了一系列与酶活性和热稳定性有关的关键残基，从根本上推进了荧光素酶的优化和实际应用。

3、南极磷虾荧光素酶akl以荧光素为底物，以atp提供能量，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种南极磷虾荧光素酶突变体，其特征在于，所述的突变体是氨基酸序列SEQ IDNO:1的南极磷虾荧光素酶的312位或348位发生了突变；其中312位的氨基由S突变为P，第348位的氨基由E突变为K。

2.如权利要求1所述的南极磷虾荧光素酶突变体，其特征在于，所述的突变体，其中312位发生了突变的南极磷虾荧光素酶突变体，其氨基酸序列为SEQ ID NO:3。

3.如权利要求2所述的南极磷虾荧光素酶突变体，其特征在于，所述的突变体，其编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:4。

4.如权利要求1所述的南极磷虾荧光素酶突变体，其特征在于，所述的突变体，其...

【技术特征摘要】

1.一种南极磷虾荧光素酶突变体，其特征在于，所述的突变体是氨基酸序列seq idno:1的南极磷虾荧光素酶的312位或348位发生了突变；其中312位的氨基由s突变为p，第348位的氨基由e突变为k。

2.如权利要求1所述的南极磷虾荧光素酶突变体，其特征在于，所述的突变体，其中312位发生了突变的南极磷虾荧光素酶突变体，其氨基酸序列为seq id no:3。

3.如权利要求2所述的南极磷虾荧光素酶突变体，其特征在于，所述的突变体，其编码基因的核苷酸序列为seq id no:4。

4.如权利要求1所述的南极磷虾荧光素酶突变体，其特征在于，所述的突变体，其中348位发生了突变的南极磷虾荧光素酶突变体，其氨基酸序列为seq id no:5。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪晓峰，盛军，郑媛，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：