一种基于2μ质粒的拷贝数调控方法及其应用技术

本申请涉及合成生物技术领域，公开了一种基于2μ质粒的拷贝数调控系统，包括一种可控拷贝数的质粒及其表达体系，其调控方法包括以下步骤：S1、在酿酒酵母细胞的基因组中或质粒上插入不同强度启动子驱动表达的内源蛋白序列；S2、所述酿酒酵母细胞或所述质粒表达不同强度的内源蛋白；S3、转入缺失所述内源蛋白序列的2μ质粒；S4、完成所述2μ质粒的拷贝数调控。本申请通过人工改造内源2μ质粒的复制分离蛋白表达量，改变质粒的拷贝数，扩大拷贝数的范围，无需外加抗生素或诱导剂，大大降低培养成本，且对菌株生长快慢几乎无影响。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及合成生物，主要涉及一种基于2μ质粒的拷贝数调控方法及其应用。

技术介绍

1、质粒是细菌和其他细胞中的小型、环状的dna分子，它独立于染色体外独立复制的双链dna片段。在合成生物学中，质粒被用作载体，在dna克隆、基因编辑、基因重组表达和构建基因环路等方面应用广泛。质粒的拷贝数，即一个细胞中质粒的数目，对于基因表达的效率和稳定性至关重要，因此质粒拷贝数是质粒应用需要考虑的首要问题，在大肠杆菌等原核生物中，已初步建立了可调控质粒拷贝数的几个系统，质粒拷贝数可以通过不同的机制进行调控，例如使用不同的复制起点和复制控制蛋白。这些系统可以根据需要调整质粒的拷贝数，以优化基因表达或避免潜在的毒性效应。

2、在原核生物如大肠杆菌中，质粒拷贝数的调控机制相对成熟，研究者们已经开发了几种不同的系统来控制质粒拷贝数。绝大多数策略只能静态调控质粒拷贝数，即拷贝数值固定，通过突变、过表达特定基因或整合特定的转录因子来改变起始复制序列(ori)或复制调控元件实现质粒拷贝数的静态调控，例如在pces质粒中，通过调整除了主要的复制起始点之外的参与调控dna复制过程本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于2μ质粒的拷贝数调控方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于2μ质粒的拷贝数调控方法，其特征在于，所述S1中，内源蛋白序列包括FLP基因、REP1基因、REP2基因和RAF1基因。

3.根据权利要求1所述的基于2μ质粒的拷贝数调控方法，其特征在于，所述S1中，所述启动子的插入位点为所述内源蛋白序列前端。

4.根据权利要求1所述的基于2μ质粒的拷贝数调控方法，其特征在于，所述S2中，内源蛋白包括Flp蛋白、Rep1蛋白、Rep2蛋白和Raf蛋白。

5.根据权利要求1所述的基于2μ质粒的拷贝数调控方法，其特征在...

【技术特征摘要】

1.一种基于2μ质粒的拷贝数调控方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于2μ质粒的拷贝数调控方法，其特征在于，所述s1中，内源蛋白序列包括flp基因、rep1基因、rep2基因和raf1基因。

3.根据权利要求1所述的基于2μ质粒的拷贝数调控方法，其特征在于，所述s1中，所述启动子的插入位点为所述内源蛋白序列前端。

4.根据权利要求1所述的基于2μ质粒的拷贝数调控方法，其特征在于，所述s2中，内源蛋白包括flp蛋白、rep1蛋白、rep2蛋白和raf蛋白。

5.根据权利要求1所述的基于2μ质粒的拷贝数调控方法，其特征在于，所述基于2μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗周卿，黎安妮，戴俊彪，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：