一种高稳定性PRSSV-GP5纳米抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种高稳定性PRSSV‑GP5纳米抗体及其制备方法和应用，属于PRSSV疫苗技术领域。本发明专利技术提供的PRSSV‑GP5纳米抗体与抗原PRSSV‑GP5的亲和力强、稳定性高，平衡离解常数Kd为3.84×10<supgt;‑7</supgt;M，化学计量N为1.13，焓变ΔH为‑389.24KJ/mol，熵变ΔS为‑1183.35J/mol·K；与抗原的最适浓度均为5μg/mL，在浓度为0.005μg/mL时依然与GP5蛋白具有一定的结合能力；提供的PRSSV‑GP5纳米抗体的制备方法，简单易操作，可以用于与抗原亲和力强、稳定性高、结合浓度低的PRSSV‑GP5纳米抗体的制备。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及prssv疫苗，尤其是涉及一种高稳定性prssv-gp5纳米抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

1、纳米抗体（nb）是一种源自骆驼、羊驼等动物hcabs可变结构域的单域抗体，具有分子量小、结构简单、生物相容性好、渗透性强，能够穿透血脑屏障，能访问深层隐藏目标的特点，在探寻新药靶点等方面具有显著优势，在临床诊断及治疗方面具有广阔的应用前景。但是其体积特性也有弊端，体积小容易被肾脏快速滤出体外，导致纳米抗体在机体内滞留时短，严重影响其治疗效果。

2、猪繁殖与呼吸综合征病毒（prssv）有8种结构蛋白，分别为gp2、e、gp3、gp4、gp5、m、n、orf5a，研究表明nsp2、gp5和m蛋白均具有prssv的中和抗体的靶点，而且gp5和m蛋白与猪免疫系统对prssv的清除有关。gp5的本质是一种糖基化囊膜蛋白，根据gp5的位置结构，将其分为信号肽区域、膜外区、3次跨膜区和c末端的膜内区。其中在gp5的膜外区中和表位之前存在一个诱骗性非中和表位，可对猪体免疫系统屏蔽，使得机体对中和表位产生的特异性反应降低，导致机体对prssv的识别和本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高稳定性PRSSV-GP5纳米抗体，其特征在于：所述高稳定性PRSSV-GP5纳米抗体为Nb7，Nb7的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.一种如权利要求1所述的高稳定性PRSSV-GP5纳米抗体的制备方法，其特征在于，步骤如下：

3.根据权利要求2所述的一种高稳定性PRSSV-GP5纳米抗体的制备方法，其特征在于：S1中分别于羊驼背部皮下进行免疫；PRSSV-GP5抗原注射量为200μg/次，初次免疫使用完全弗氏佐剂稀释抗原，乳化后注射；第2次至第4次免疫使用不完全弗氏佐剂稀释抗原进行免疫；每次免疫间隔2...

【技术特征摘要】

1.一种高稳定性prssv-gp5纳米抗体，其特征在于：所述高稳定性prssv-gp5纳米抗体为nb7，nb7的核苷酸序列如seq id no.5所示，氨基酸序列如seq id no.6所示。

2.一种如权利要求1所述的高稳定性prssv-gp5纳米抗体的制备方法，其特征在于，步骤如下：

3.根据权利要求2所述的一种高稳定性prssv-gp5纳米抗体的制备方法，其特征在于：s1中分别于羊驼背部皮下进行免疫；prssv-gp5抗原注射量为200μg/次，初次免疫使用完全弗氏佐剂稀释抗原，乳化后注射；第2次至第4次免疫使用不完全弗氏佐剂稀释抗原进行免疫；每次免疫间隔2周。

4.根据权利要求2所述的一种高稳定性prssv-gp5纳米抗体的制备方法，其特征在于：s2中第一轮巢式pcr以获得的cdna为模板，以call001-f和call002-r为引物，call001-f的序列如seq id no.1所示，call002-r的序列如seq id no.2所示；第二轮巢式pcr以第一轮巢式pcr的胶回收产物为模板，以vhh-f和vhh-r为引物，vhh-f的序列如seq id no.3所示，vhh-r的序列如seq id no.4所示。

5.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛之霖，姬凯元，张运海，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：